TLR2mAb和TLR4mAb對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠急性期潰瘍性結(jié)腸炎干預(yù)作用的研究.pdf

1、目的：探討TLR2單克隆抗體(Tolllikereceptor2monoantibody，TLR2mAb)和TLR4單克隆抗體(Tolllikereceptor4monoantibody，TLR4mAb)對(duì)葡聚糖硫酸鈉(dextransulfatesodium，DSS)誘導(dǎo)的小鼠急性期潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerativecolitis，UC)的干預(yù)作用及其可能機(jī)制。
　　方法：50只雄性BALB/c小鼠分為A～E組：對(duì)照組(A組)、

2、UC模型組(B組)及TLR2mAb干預(yù)組(C組)、TLR4mAb干預(yù)組(D組)、TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組(E組)。A組小鼠飲用蒸餾水7天；B-E組小鼠僅飲用5％DSS水溶液7天以產(chǎn)生急性期潰瘍性結(jié)腸炎模型。于造模第1、3、5、7天進(jìn)行干預(yù)，C、D、E干預(yù)組小鼠分別給予TLR2mAb(10μg)、TLR4mAb(10μg)、TLR2mAb(10μg)+TLR4mAb(10μg)腹腔內(nèi)注射，A、B組給予腹腔內(nèi)注射生理鹽水，以

3、觀察TLR2mAb和TLR4mAb的干預(yù)作用。觀察指標(biāo)包括疾病活動(dòng)指數(shù)(diseaseactivityindex，DAI)、結(jié)腸組織病理學(xué)評(píng)分(histopathologicalscore，HS)。造模及干預(yù)7天后處死小鼠，采用Realtime-PCR法檢測(cè)各組結(jié)腸黏膜TLR2、TLR4、IFN-γ、IL-4及IL-17的mRNA表達(dá)，Western-Blot法檢測(cè)各組腸粘膜磷酸化p38αMAPK、c-jun、c-fos、磷酸化IKK蛋

4、白表達(dá)，EMSA法檢測(cè)NF-κB的活性變化。
　　結(jié)果
　　第一部分TLR2mAb和TLR4mAb對(duì)葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的小鼠急性期潰瘍性結(jié)腸炎癥狀及病理改變的影響：
　　造模結(jié)束時(shí)，模型組小鼠產(chǎn)生典型的腹瀉、血便、體重減輕等潰瘍性結(jié)腸炎表現(xiàn)。對(duì)照組、模型組、TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組、TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組的DAI分別為0.50±0.707、9.70±2.406、6.75±3.495、7

5、.75±3.919、5.70±3.498。模型組DAI明顯高于對(duì)照組(P<0.01)；TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組DAI明顯低于模型組(P<0.05)，且明顯高于對(duì)照組(P<0.01)；TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組DAI與模型組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　對(duì)照組、模型組、TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組、TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組的HS分別為6.40±3.273、16.

6、50±2.991、13.25±3.576、14.50±3.625、9.50±3.308。模型組HS明顯高于對(duì)照組(P<0.01)；TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組HS明顯低于模型組(P<0.01)和TLR4mAb干預(yù)組(P<0.05)，與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組HS與模型組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　第二部分TLR2mAb和TLR4mAb對(duì)葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的

7、小鼠急性期潰瘍性結(jié)腸炎腸黏膜細(xì)胞因子的影響：
　　對(duì)照組、模型組、TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組、TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組小鼠腸黏膜TLR2mRNA表達(dá)量如下：0.26±0.397、1.96±1.558、0.64±1.030、0.39±0.594、0.42±0.461。模型組TLR2mRNA表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P<0.01)；TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組、TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合

8、干預(yù)組TLR2mRNA表達(dá)明顯低于模型組(P<0.05)，與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　對(duì)照組、模型組、TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組、TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組小鼠腸黏膜TLR4mRNA表達(dá)量如下：0.52±0.414、1.16±0.568、0.45±0.346、0.51±0.374、0.44±0.335。模型組TLR4mRNA表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P<0.01)；TLR2mAb干預(yù)組、TL

9、R4mAb干預(yù)組、TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組TLR4mRNA表達(dá)明顯低于模型組(P<0.01，P<0.05，P<0.01)，與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　對(duì)照組、模型組、TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組、TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組小鼠腸黏膜IFN-γ-mRNA表達(dá)量如下：0.80±0.802、2.40±1.089、0.95±1.075、0.97±0.716、0.93±0.661。

10、模型組IFN-γmRNA表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P<0.01)；TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組、TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組IFN-γmRNA表達(dá)明顯低于模型組(P<0.05，P<0.05，P<0.01)，與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　對(duì)照組、模型組、TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組、TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組小鼠腸黏膜IL-4mRNA表達(dá)量如下：0.12±0.107、0.

11、86±1.185、0.02±0.025、0.02±0.025、0.03±0.024。模型組IL-4mRNA表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P<0.05)；TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組、TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組TL-4mRNA表達(dá)明顯低于模型組和對(duì)照組(P<0.01)。
　　對(duì)照組、模型組、TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組、TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組小鼠腸黏膜IL-17mRNA表達(dá)量如下：0

12、.18±0.230、0.61±0.296、0.18±0.236、0.17±0.197、0.06±0.039。模型組IL-17mRNA表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P<0.01)；TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組、TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組IL-17mRNA表達(dá)明顯低于模型組(P<0.01)，與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　第三部分TLR2mAb和TLR4mAb對(duì)葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的小鼠急性期潰瘍性結(jié)腸炎TL

13、R2和TLR4共同介導(dǎo)的信號(hào)通路的影響：
　　對(duì)照組、模型組、TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組、TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組小鼠腸黏膜磷酸化P38αMAPK蛋白表達(dá)量如下：0.45±0.037、1.42±0.131、1.57±0.068、0.89±0.033、0.75±0.024。模型組、TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組磷酸化P38αMAPK蛋白表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P<0.01)；TLR4mAb干預(yù)

14、組、TLR2mAb+TLR4mAb干預(yù)組蛋白表達(dá)明顯低于模型組(P<0.01)，TLR2mAb干預(yù)組蛋白表達(dá)與模型組無(wú)明顯差異(P>0.05)；TLR2mAb+TLR4mAb干預(yù)組蛋白表達(dá)與對(duì)照組無(wú)明顯差異(P>0.05)。
　　對(duì)照組、模型組、TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組、TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組小鼠腸黏膜c-jun蛋白表達(dá)量如下：0.28±0.060、1.17±0.074、1.00±0.078、0

15、.75±0.183、0.42±0.062。模型組、TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組c-jun蛋白表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P<0.01)；TLR4mAb干預(yù)組、TLR2mAb+TLR4mAb干預(yù)組蛋白表達(dá)明顯低于模型組(P<0.01)，TLR2mAb干預(yù)組蛋白表達(dá)與模型組無(wú)明顯差異(P>0.05)；TLR2mAb+TLR4mAb干預(yù)組蛋白表達(dá)與對(duì)照組無(wú)明顯差異(P>0.05)。
　　對(duì)照組、模型組、TLR2mAb干預(yù)組、TLR

16、4mAb干預(yù)組、TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組小鼠腸黏膜c-fos蛋白表達(dá)量如下：0.46±0.013、0.48±0.010、0.46±0.017、0.45±0.012、0.45±0.015。組間均無(wú)明顯差異(P>0.05)。
　　對(duì)照組、模型組、TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組、TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組小鼠腸黏膜磷酸化IKK蛋白表達(dá)量如下：0.11±0.022、0.66±0.013、0.34±

17、0.014、0.18±0.010、0.14±0.013。模型組、TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組磷酸化IKK蛋白表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P<0.01)；TLR2mAb、TLR4mAb、TLR2mAb+TLR4mAb干預(yù)組蛋白表達(dá)明顯低于模型組(P<0.01)；TLR4mAb、TLR2mAb+TLR4mAb干預(yù)組蛋白表達(dá)明顯低于TLR2mAb干預(yù)組(P<0.01)；TLR2mAb+TLR4mAb干預(yù)組蛋白表達(dá)與對(duì)照組無(wú)明顯差異(P>

18、0.05)。
　　對(duì)照組、模型組、TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組、TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組小鼠腸黏膜NF-κB的活性如下：5.18±0.685、21.24±1.150、18.13±1.451、6.15±0.429、6.12±0.575。模型組NF-κB表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P<0.01)；TLR2mAb干預(yù)組、TLR4mAb干預(yù)組、TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)組IL-17mRNA表達(dá)明顯低于模型

19、組(P<0.01)，與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：DSS誘導(dǎo)的急性期潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸粘膜的TLR2和TLR4表達(dá)明顯高于正常。TLR2mAb和TLR4mAb聯(lián)合干預(yù)可以緩解潰瘍性結(jié)腸炎模型小鼠腹瀉、血便、體重下降的癥狀，減輕結(jié)腸黏膜組織炎癥反應(yīng)，下調(diào)細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17的表達(dá)，并降低信號(hào)傳導(dǎo)通路中磷酸化P38αMAPK、c-jun、磷酸化IKK及NF-κB蛋白表達(dá)，故對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠急