姜黃素對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎療效的研究.pdf

1、目的:潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)是一種腸道非特異性炎癥性疾病,屬于炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)的一種,其病因及發(fā)病機(jī)制尚未清楚.有研究證實(shí)促炎和抗炎細(xì)胞因子失衡在IBD發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用,細(xì)胞因子可以激活NF-κB,而多種促炎細(xì)胞因子的啟動(dòng)子部位都有NF-κB位點(diǎn),它是細(xì)胞因子釋放的關(guān)鍵調(diào)控因素。阻斷NF-κB信號(hào)通路,減少細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生,減輕

2、炎癥反應(yīng),是治療IBD的新思路。本實(shí)驗(yàn)將姜黃素用于治療葡聚糖硫酸鈉(dextran sulphate sodium,DSS)誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型,檢測NF-κB激活及其抑制蛋白IκB的表達(dá)和細(xì)胞因子TNF-α、IL-6的濃度,從而觀察姜黃素治療結(jié)腸炎模型的療效,探討其對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎可能的抗炎機(jī)制。
　　 方法:選健康雌性BALB／c小鼠60只,鼠齡6-7 wk,體質(zhì)量18-22 g,隨機(jī)分為4組,每組15只.A組:正常對(duì)照

3、組,每日進(jìn)飲用水及飼料,不做處理,共7 d；B組:DSS結(jié)腸炎組,每日自由飲用5％DSS溶液,每日腹腔注射與C組等體積的25ml／L乙醇溶液,共7 d；C組:姜黃素治療組,飲用5％DSS溶液,每日腹腔注射姜黃素懸液1次(每次按30mg／kg的劑量溶于25ml／L乙醇1000μL),共7 d；D組:地塞米松治療組,飲用5％DSS溶液,每日腹腔注射1次地塞米松針劑(每次劑量為0.4mg／kg溶于生理鹽水1000μL),共7 d.7 d后處死

4、全部小鼠,留取結(jié)腸組織送病理、另留2份保存于液氮中用于Western blot和ELISA檢測。各組小鼠每日記錄疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)評(píng)分,H-E染色觀察小鼠結(jié)腸黏膜組織學(xué)改變.ELISA法測定結(jié)腸組織中腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細(xì)胞介素(IL)-6含量.免疫組化染色觀察核因子-κB(NF-κB)在結(jié)腸組織炎性細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況。Westernblot檢測結(jié)腸組織胞漿NF-κB抑制蛋白IκB的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:1.DAI

5、評(píng)分:A組:0.37±0.52,B組:7.67±1.56,C組:1.64±0.92,D組:2.80±0.92,評(píng)分示B組與C組、D組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。C組與D組比較也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01).2.組織學(xué)評(píng)分:B組小鼠結(jié)腸炎癥主要累及黏膜和黏膜下層,少數(shù)可達(dá)漿膜層,結(jié)腸黏膜不完整,可見多灶性淺潰瘍,大部分腺體被破壞,腺體正常結(jié)構(gòu)喪失,可見密集炎性細(xì)胞浸潤。C組、D組小鼠結(jié)腸腺體破壞較輕,結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常,炎性細(xì)胞浸

6、潤深度較B組淺,炎性細(xì)胞數(shù)量也顯著減少。B組的評(píng)分(2.83±0.83)明顯高于C組、D組的評(píng)分(1.36±0.50、2.00±0.67),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；C組的評(píng)分低于D組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)3.結(jié)腸黏膜TNF-α、IL-6的濃度測定:B組TNF-α、IL-6的濃度分別為[(102.75±3.52)pg／ml、(80.94±3.26)pg／ml],明顯高于C組[(75.91±1.59)pg／ml、(59

7、.65±1.39)pg／ml]、D組[(78.25±2.15)pg／ml、(65.57±4.04)pg／ml]的濃度,B組與C組、D組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01).C組與D組比較,TNF-α的濃度兩者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而IL-6的濃度有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。4小鼠結(jié)腸組織中NF-κB的表達(dá):A組在胞質(zhì)中偶有表達(dá),B組胞質(zhì)和胞核均呈現(xiàn)強(qiáng)表達(dá),C組在胞漿表達(dá),胞核中也有少許表達(dá),D組胞質(zhì)和胞核中均有表達(dá),但弱于B組。B組評(píng)

8、分(7.92±1.24)與C組(2.73±0.79)、D組(4.22±1.09)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),C組與D組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。5.結(jié)腸組織IκBα蛋白的表達(dá):Western blot顯示B組結(jié)腸組織中Iκ3α蛋白水平與A組相比明顯下降,C組、D組蛋白水平與B組相比明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論:1、細(xì)胞因子、NF—κB在UC的發(fā)病中起著重要作用；2、姜黃素可以有效