姜黃素對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、 目的：探討姜黃素對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠急性期UC的腫瘤壞死因子(TNF)-α、髓過(guò)氧化物酶(MPO)影響及其對(duì)UC治療作用,同時(shí)檢測(cè)結(jié)腸黏膜磷酸化 p38MAPK 及 p38MAPK mRNA 的表達(dá),探討p38MAPK信號(hào)通路在潰瘍性結(jié)腸炎疾病中的機(jī)制,以及姜黃素對(duì)小鼠UC模型中p38MAPK通路的影響。方法：將健康60只雌性BALB/c小鼠,鼠齡6-7wk,體重16-20g,按隨機(jī)數(shù)字表分為6組：正常組(A組)、模型組(B組)、地塞

2、米松干預(yù)組(C組：1.5mg/kg.d)、姜黃素低劑量干預(yù)組(D 組：姜黃素 15mg/kg.d)、姜黃素中劑量干預(yù)組(E組：姜黃素 30mg/kg.d )、姜黃素高劑量干預(yù)組( F 組：姜黃素60mg/kg.d),每組 10 只。正常組自由飲水,其余各實(shí)驗(yàn)組小鼠均給予5%DSS溶液連續(xù)7d自由飲用,并在造模第一天同時(shí)開(kāi)始腹腔注射給藥,姜黃素低、中、高劑量干預(yù)組分別按上述劑量給藥,正常組注射等體積生理鹽水,模型組注射等體積的 2.5%乙

3、醇溶液。在實(shí)驗(yàn)期間每天定時(shí)觀察各組小鼠進(jìn)食、飲水、毛色、活動(dòng)及大便性狀,稱量體重,觀察大便隱血情況,并進(jìn)行疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分(DAI),至造模第8天全部小鼠均處死,收集小鼠結(jié)腸組織,一部分用于石蠟包埋切片,HE染色,并觀察組織病理學(xué)損傷情況,行組織學(xué)評(píng)分；另取兩份組織保存于液氮中備用。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)結(jié)腸黏膜組織腫瘤壞死因子(TNF)-α、髓過(guò)氧化物酶(MPO)的表達(dá)；應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色觀察結(jié)腸組織p-p38MAPK

4、的表達(dá)情況及逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)氨酶鏈聚合反應(yīng)( RT-PCR )方法檢測(cè)結(jié)腸組織內(nèi) p38MAPK mRNA的表達(dá)。結(jié)果：1.B組小鼠癥狀、組織學(xué)檢查均符合UC診斷標(biāo)準(zhǔn),且DAI及組織學(xué)評(píng)明顯高于A組,經(jīng)過(guò)地塞米松和姜黃素干預(yù)后,C組、D組、E組和F組DAI及組織學(xué)評(píng)分有不同程度的降低。2.ELISA 結(jié)果：B 組結(jié)腸黏膜中 TNF-α、MPO 的含量分別為( 382.26±21.82、339.31±13.61 )明顯高于 C 組( 257.42

5、±19.04、238.95±11.17)、D組(333.67±17.72、298.93±9.94)、E組(287.89±19.57、258.60±13.07)和F組(271.10±13.25、248.52±9.24),有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均<0.01),C組的含量顯著低于D組、E組的含量,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),C組同F(xiàn)組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；E組、F組較D組含量低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),F組較E組降低,但

6、差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3.免疫組織化學(xué)法結(jié)果：B 組小鼠結(jié)腸黏膜p-p38MAPK表達(dá)(6.80±0.77)明顯高于A組(0.52±0.32),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),經(jīng)地塞米松及姜黃素低、中、高劑量干預(yù)后,C 組(2.50±0.82)、D 組(4.36±1.02)、E 組(3.62±0.79)、F 組(3.12±0.63)均較B組有顯著降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01),C組表達(dá)明顯低于D組、E組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

7、義(P<0.05),D組較E組、F組升高(P值均<0.05),E組與F組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。4.RT-PCR結(jié)果：B組結(jié)腸組織內(nèi)p38MAPK mRNA明顯高于A組,C組、D組、E組和F組均較B組有不同程度的降低,其中以F組表達(dá)最低。結(jié)論：姜黃素對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠急性期UC有一定治療作用,可能是通過(guò)抑p38MAPK信號(hào)通路,減少TNF-α等促炎因子的釋放,減輕中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn),從而減輕UC小鼠腸粘膜炎癥損傷而發(fā)揮治療UC作