翁連解毒湯對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠IL-17、TLR2的影響.pdf

1、目的：潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）是發(fā)生在直腸和結(jié)腸的、累及黏膜及黏膜下層的慢性非特異性炎癥性疾病，發(fā)病率高，且易復(fù)發(fā)，病程較長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)通過觀察翁連解毒湯方對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠的一般狀態(tài)、疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）評(píng)分、血清IL-17含量及結(jié)腸組織TLR2表達(dá)的影響，探討翁連解毒湯治療潰瘍性結(jié)腸炎的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：將60只潔凈雄性健康Wistar大鼠根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為6組，

2、每組10只，分別為空白對(duì)照組（NG）、模型組（MG）、西藥美沙拉嗪組（XG）、中藥高劑量組（HG）、中藥中劑量組（ZG）、中藥低劑量組（LG）。空白對(duì)照組（NG）正常飼養(yǎng)，其余5組大鼠均采用三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇聯(lián)合造模方法建立潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型。自造模后第4天，各組大鼠除NG、MG正常飼養(yǎng)外，余治療組大鼠除基礎(chǔ)飼養(yǎng)外合用藥物灌胃，其中XG組大鼠采取美沙拉嗪混懸液灌胃，HG、ZG和LG大鼠采用不同的濃度的翁連解毒湯灌胃治療。連

3、續(xù)治療2周后，觀察大鼠在各個(gè)時(shí)期的精神狀態(tài)、飲食、被毛、糞便性狀、體重等一般狀態(tài)的變化并記錄，做出疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分表。治療結(jié)束后，各組大鼠禁食不禁水24小時(shí)，利多卡因麻醉大鼠取股動(dòng)脈血，用雙抗體夾心ABC-ELLISA法檢測(cè)血清IL-17含量，解剖并取其肉眼觀察病變較重部位的結(jié)腸組織，常規(guī)石蠟包埋、切片、HE染色，檢測(cè)TLR2的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1、一般情況觀察：NG大鼠一般狀態(tài)良好，余組大鼠精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，進(jìn)

4、食水量減少，體重下降，糞便稀薄夾雜粘液、膿血。藥物灌胃治療后各組大鼠精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)，進(jìn)食量明顯增多，體重下降減慢，粘液、膿血便減少或消失，其中HG改善最明顯，ZG、XG改善無明顯差異，較HG略差，較LG較好。
　　DAI評(píng)分結(jié)果提示：XG、HG、ZG、LG與MG相比較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；XG、ZG、LG與HG相比較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；XG與ZG無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;XG、ZG與LG相比較低

5、，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　2、結(jié)腸黏膜肉眼與病理學(xué)觀察
　　肉眼觀察：NG大鼠上皮黏膜光滑完整。MG大鼠黏膜充血水腫糜爛面最明顯。HG大鼠黏膜較光滑，潰瘍面極少。XG和ZG大鼠黏膜欠光滑，可見較少的潰瘍面。LG大鼠黏膜組織輕度充血水腫，潰瘍?cè)钶^多。
　　組織病理學(xué)觀察：NG大鼠黏膜光滑，腺體結(jié)構(gòu)排列規(guī)則。MG大鼠黏膜粗糙，可見多發(fā)、彌漫性糜爛或潰瘍面，局部腺體破壞最明顯，可見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。HG組黏膜

6、較光滑完整，新生腺體最多。XG和ZG大鼠黏膜欠光滑，可見少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，潰瘍面較少。LG大鼠黏膜組織輕度充血水腫，遺留潰瘍?cè)钶^多，少數(shù)處于愈合期，潰瘍面及邊緣覆于少量新生腺體，見附圖Fig.1-Fig.12。
　　3、指標(biāo)檢測(cè)
　　IL-17含量比較：MG、XG、HG、ZG、LG與NG相比含量較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；HG、XG、ZG、LG與 MG相比，含量較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）； XG、ZG

7、、LG與HG相比含量較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；XG、ZG與LG相比含量較低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；XG與ZG相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　TLR2表達(dá)比較：MG、XG、HG、ZG、LG與 NG相比表達(dá)較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；XG、HG、ZG、LG與 MG相比，表達(dá)較低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；HG較XG、ZG、LG相比，表達(dá)較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.0

8、5）；ZG、XG與LG相比，表達(dá)較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；XG與ZG相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　翁連解毒湯能夠改善潰瘍性結(jié)腸炎大鼠的一般情況并且能夠修復(fù)損傷的黏膜，降低DAI評(píng)分，并呈現(xiàn)一定的量-效關(guān)系，其特點(diǎn)為隨著中藥濃度的升高而療效增加，其作用機(jī)制可能通過降低TLR2的表達(dá)、減少IL-17的含量，從而阻斷炎癥反應(yīng)，減少炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，刺激局部組織再生與修復(fù)，達(dá)到愈合潰瘍面的作用