葛仙湯治療大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 通過比較滅活大腸桿菌(E.Coli)菌株免疫+乙酸(AA)灌腸、單純滅活大腸桿菌(E.Coli))免疫、單純乙酸(AA)灌腸三種不同方法建立的潰瘍性結(jié)腸炎模型,探討一種理想的潰瘍性結(jié)腸炎造模方法；從結(jié)腸組織、血液指標(biāo)、血清免疫學(xué)指標(biāo)、結(jié)腸組織免疫指標(biāo)、肝腎功能等方面,對葛仙湯治療大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的機(jī)制進(jìn)行深入研究,為將葛仙湯開發(fā)成治療潰瘍性結(jié)腸炎藥展示良好的發(fā)展前景。
　　 方法:
　　 1.健康S

2、D雄性大鼠120只,隨機(jī)均分為4組,第1、2組分別在實驗第1、7、14、20D用滅活大腸桿菌菌株懸濁液注射于大鼠足底、腹部、背部皮下及腹腔內(nèi),第4組對照組以等量生理鹽水替代。實驗第21d,第1、3組用5％乙酸灌腸。每日觀察各組大鼠精神狀態(tài)、毛色、飲食、大便性狀,每周稱重、檢測大鼠大便隱血:分別于乙酸灌腸后第1w、2w、3w每組隨機(jī)處死10只,斷頭取血,檢測血清中IL-6的變化,處死大鼠,測量結(jié)腸長度并稱重,肉眼及光鏡觀察結(jié)腸粘膜組織改變

3、,免疫組化檢測結(jié)腸中TNF-α陽性表達(dá)。
　　 2.用滅活大腸桿菌(E.Coli)菌株免疫+乙酸(AA)灌腸法造潰瘍性結(jié)腸炎模型成功后的SD大鼠40只均按照隨機(jī)化原則分為葛仙湯高劑量組、葛仙湯中劑量組、葛仙湯低劑量組、對照組,葛仙湯高、中、低劑量組分別予以生藥24g/kg、12g/kg、6g/kg灌胃給藥。觀察各組大鼠精神狀態(tài)、毛色、飲食、大便形狀、體重,檢測大鼠大便隱血；灌胃后21D處死所有大鼠,檢測血清中IL-6、IL-10

4、、白細(xì)胞、血小板、SCr、BUN、AST、ALT,測量結(jié)腸長度并稱重,觀察腸壁組織學(xué)變化,免疫組化檢測結(jié)腸TNF-α、iNOS表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.第1組乙酸灌腸后2D開始出現(xiàn)精神萎靡,反應(yīng)遲鈍,活動減少,扎堆,毛色無華、變脆；大便次數(shù)增多,大便變稀,出現(xiàn)粘液血便或膿血便,體重減輕；1-3w結(jié)腸潰瘍、炎癥、增厚,長度縮短,結(jié)腸重量增加；結(jié)腸粘膜充血、水腫、高度糜爛,有單個或多處潰瘍；結(jié)腸重度炎癥,病變深及粘膜下

5、層、肌層、漿膜層,基底2/3隱窩被破壞,或僅有完整表面上皮；血清IL-6、腸粘膜TNF-α陽性表達(dá)積分值明顯升高:各指標(biāo)均與對照組有顯著性差異。
　　 2.第2組造模完成后1-3w,大鼠精神狀態(tài)可,活動如常,無明顯扎堆,毛色稍無光澤,大便質(zhì)稍軟,未見稀變及粘液便,大便隱血實驗(+),無明顯體重減輕；結(jié)腸重量、長度與對照組無差異；結(jié)腸粘膜輕度充血、水腫,輕度糜爛,無潰瘍形成；結(jié)腸粘膜呈慢性炎癥改變,病變局限于粘膜下層,基底1/3隱

6、窩被破壞；血清IL-6稍升高；腸粘膜TNF-α陽性表達(dá)積分值增高；以上各觀測指標(biāo)均與對照組無差異。
　　 3.第3組造模完成后1w時出現(xiàn)精神萎靡,反應(yīng)遲鈍,活動減少,扎堆,毛色無華、變脆；大便次數(shù)增多,大便變稀,出現(xiàn)粘液血便或膿血便,體重減輕；結(jié)腸潰瘍、炎癥、增厚,長度縮短,結(jié)腸重量增加；結(jié)腸粘膜粘膜充血、水腫、高度糜爛,有單個或多處潰瘍；結(jié)腸重度炎癥,病變深及粘膜下層、肌層、漿膜層,基底2/3隱窩被破壞,或僅有完整表面上皮；血

7、清IL-6、腸粘膜TNF-α陽性表達(dá)增高；以上各指標(biāo)均與對照組有差異。2-3w時體重逐漸增加,大便逐漸變硬,粘液膿血便逐漸消失,隱血(+)；結(jié)腸長度增長,重量減輕；結(jié)腸粘膜充血水腫減輕,潰瘍逐漸愈合；病變局限于粘膜下層,基底1/3隱窩被破壞；血清IL-6、腸粘膜TNF-α陽性表達(dá)積分值逐漸下降；各組指標(biāo)3w時與對照組無明顯差異。
　　 4.葛仙湯各治療組結(jié)腸炎癥、充血、水腫減輕,病變范圍縮小,隱窩破壞減少,結(jié)腸粘膜糜爛和潰瘍愈合

8、,大便逐漸成形,膿血便減少,體重增加,疾病活動指數(shù)高、中、低與對照組有顯著性差異,P<0.01,高、中、低劑量組之間無差異,P>0.05。
　　 5.葛仙湯各治療組血中白細(xì)胞、血小板數(shù)量減少,高、中、低治療組與對照組之間均有顯著性差異,P<0.01,各治療對于降低白細(xì)胞方面無差異,高劑量降低血小板與中低劑量之間均有差異,P<0.05。高、低劑量組對紅細(xì)胞數(shù)量無明顯升高作用,與對照組無差異。中劑量組紅細(xì)胞數(shù)量增高與對照組有差異,但

9、與正常組差異顯著。
　　 6.葛仙湯各治療組大鼠血清IL-6含量減少,IL-10的含量增加,高、中、低治療組與對照組之間均有顯著性差異,P<0.01,高劑量升高IL-10的含量的作用與中、低劑量組有差異,P<0.05；中劑量降低IL-6含量的作用與高、低劑量有差異,P<0.05。
　　 7.葛仙湯各治療組結(jié)腸組織中iNOS、TNF-κ陽性表達(dá)積分值降低,高、中、低劑量組與對照組之間均有顯著性差異,P<0.01,高、中劑量

10、組與低劑量組之間有差異,P<0.05,高、中劑量組之間無差異。
　　 8.葛仙湯高、中、低治療組血清中SCr、BUN、AST、ALT與正常組、對照組之間均無顯著性差異,P>0.05。
　　 結(jié)論:
　　 1.滅活大腸桿菌(E.Coli)菌株免疫+乙酸(AA)灌腸免疫復(fù)合法建立的潰瘍性結(jié)腸炎模型,病變更類似人UC,持續(xù)時間長,是較理想的造模方法。2.葛仙湯對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎具有減少炎癥細(xì)胞、血小板數(shù)量。抑制炎癥因子