腹瀉型腸易激綜合征患者結腸黏膜蛋白質的篩選與鑒定.pdf

1、[背景與目的]：腸易激綜合征(irritable bowel syndrome，IBS)是常見的功能性腸病，其發(fā)病機制尚不清楚。已提出的有胃腸動力異常，內臟敏感性改變，腦-腸相互作用、神經免疫內分泌失調等機制，但什么細胞及分子參與IBS的機制尚不清楚。細胞或器官功能的異常必然有其物質的基礎，蛋白質是生命活動的基礎，本研究應用蛋白質組學方法，尋找腹瀉型IBS(IBS withdiarrhea，IBS-D)患者和正常人結腸黏膜的差異表達蛋白

2、質，旨在篩選出對IBS-D發(fā)病起重要作用的蛋白質，揭示IBS-D的分子機制。 [材料與方法]：IBS-D患者5例，診斷均符合功能性胃腸病羅馬Ⅲ科研診斷標準，健康志愿者5例為對照組。分別在進行結腸鏡檢查時，直視下于盲腸及乙狀結腸粘膜各活檢4塊；3塊立即置于含0.1％苯甲基磺酰氟的冰鹽水中洗凈，液氮中保存；1塊于福爾馬林溶液中固定，石蠟包埋。將兩部位液氮標本等量混合，提取組織總蛋白后，進行雙向凝膠電泳。采用銀染法對凝膠進行顯色固定，

3、掃描儀獲取圖像。使用Image Master2D Elite軟件對圖像進行分析，篩選出在IBS-D組表達有明顯差異的蛋白質點；選取顯示清晰的10個點進行質譜鑒定；應用Western blot和免疫組織化學方法對其中一種蛋白質進行驗證。 [結果]：健康對照組2-DE圖譜得到1504±69個蛋白點，IBS-D組顯示1356±104個蛋白點，發(fā)現(xiàn)Volume值改變=2.0倍以上的點共41個，其中11個點表達上調，30個點表達下調。分別

4、選擇其中表達上調及下調明顯的5個點，進行質譜鑒定，表達上調的蛋白經鑒定為線粒體ATP合酶d亞基、硫轉移酶1A3/1A4、細胞質乙酰輔酶A乙?；D移酶、硫氧還蛋白和醛脫氫酶2；表達下調的蛋白為免疫球蛋白kappa鏈(immunoglobulin kappa chain，Igk)、異丁酰輔酶A脫氫酶、WDR1蛋白、T復合物蛋白1a亞單位和烯醇化酶a。應用Western blot方法對上述5例IBS-D患者和5例健康對照組的結腸黏膜的Ig k

5、和Igλ進行檢測，發(fā)現(xiàn)兩組Ig k存在顯著性差異，IBS-D組含量明顯低于對照組(P＜0.05)；Igλ無顯著性差異(P＞0.05)。對滿足羅馬Ⅲ科研標準的24例IBS-D患者和19例健康對照的盲腸和乙狀結腸黏膜標本的Ig k和Igλ免疫組織化學染色顯示，粘膜固有層漿細胞、腺泡間質、小血管壁及上皮基底膜表達Ig k和Igλ；兩組Ig k存在顯著性差異(P＜0.05)，IBS-D組表達減弱；Igλ差異不明顯。 [結論]：IBS-D