維甲酸和曲古抑素聯(lián)合誘導(dǎo)甲狀腺癌細(xì)胞分化基礎(chǔ)研究及維甲酸誘導(dǎo)分化型甲狀腺癌的初步臨床應(yīng)用.pdf

1、目的： 探討RA和TSA抑制DTC細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)DTC細(xì)胞分化的機(jī)理；探討聯(lián)合用藥增強(qiáng)誘導(dǎo)DTC細(xì)胞分化作用的可行性；評(píng)價(jià)RA誘導(dǎo)DTC患者病灶分化的能力，最終目的是提高DTC病灶對(duì)<'131>Ⅰ的攝取能力，達(dá)到用<'131>Ⅰ治療的目的。 方法： 1．將不同濃度的RA和TSA加入K1，F(xiàn)TC-133細(xì)胞株，孵育12，24，48h后，MTT法觀察細(xì)胞生存率，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)。 2．按照常規(guī)方法提取K

2、1和FTC-133細(xì)胞中RNA，RT-PCR技術(shù)測(cè)定基因mRNA表達(dá)。 3．采用電化學(xué)發(fā)光法(ECLLA)，檢測(cè)K1和FTC-133培養(yǎng)液中TG 表達(dá)；用對(duì)硝基苯磷酸鹽法檢測(cè)K1和FTC-133細(xì)胞內(nèi)的ALP活性。 4．分別利用：Immunofluorescence(IF)和Western blot技術(shù)對(duì) NIS,Pendrin蛋白進(jìn)行定位和定性表達(dá)檢測(cè)。 5．放射性測(cè)量法評(píng)價(jià)RA和TSA誘導(dǎo)后的K1和FTC

3、-133對(duì)Na<'125>Ⅰ攝取。 6．采用自身前后對(duì)照研究，通過服用RA前后DTC患者<'131>I一診斷劑量顯像(dWBS)和血清TG水平的測(cè)定，評(píng)價(jià)RA對(duì)DTC病灶分化的誘導(dǎo)能力。通過服用RA后DTC患者<'131>I一治療劑量顯像(tWBS)和治療后TG的水平，評(píng)價(jià)RA誘導(dǎo)DTC病灶分化后<'131>I的治療效果。 結(jié)果： 1．RA和TSA對(duì)K1和FTC-133細(xì)胞增殖的抑制作用具有濃度和時(shí)間依賴性，隨藥

4、物濃度增加和作用時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞有向正常細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)化的趨勢(shì)，可見有凋亡現(xiàn)象。聯(lián)合用藥抑制DTC細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)分化的作用更強(qiáng)，且可以降低藥物對(duì)細(xì)胞的毒性。 2．Kl和FTC-133中NIS和5’DI的mRNA表達(dá)隨著RA和TSA濃度增加，表達(dá)逐漸增強(qiáng)，呈依賴性關(guān)系，其中RA的作用強(qiáng)于TSA：PDS hAITmRNA表達(dá)隨著RA和TSA濃度增加，表達(dá)逐漸減弱，呈負(fù)依賴性關(guān)系；RA和TSA對(duì)TPO mRNA表達(dá)的作用較弱。聯(lián)合用藥可

5、以增強(qiáng)NIS、PDS，hAIT mRNA的表達(dá)，也可以增加5’DI、TPOmRNA表達(dá)。 3．RA和TSA誘導(dǎo)K1和FTC-133分泌TG、ALP，呈濃度和時(shí)間依賴性，隨藥物濃度增加和孵育時(shí)間的延長(zhǎng)，TG、ALP分泌增多；RA和低濃度TSA聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，增強(qiáng)效果最明顯。 4．分別用RA和TSA誘導(dǎo)后的DTC細(xì)胞，NIS和Pendrin蛋白表達(dá)明顯。聯(lián)合RA和TSA有增強(qiáng)NIS、Pendrin蛋白表達(dá)的作用。 5．R

6、A和TSA能提高Kl和FTC-133攝取碘的能力，其攝碘率和藥物濃度和孵育時(shí)間呈依賴性關(guān)系。聯(lián)合用藥，具有增強(qiáng)DTC細(xì)胞攝碘能力的作用。 6．完成RA治療的9例DTC患者，5／9例(55.56％)DTC病灶dWBS時(shí)，攝取<'131>I增多，伴TG水平升高；用<'131>I治療的DTC患者5／8例(63％)DTC病灶攝碘明顯增多，治療3—6月后TG水平降低。 結(jié)論： RA和TSA均能抑制K1和FTC-133的增殖

7、、誘導(dǎo)細(xì)胞分化，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。聯(lián)合應(yīng)用RA和TSA，能抑制K1和FTC-133增殖，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化的作用更強(qiáng)，降低藥物毒性；RA和TSA能調(diào)控甲狀腺癌細(xì)胞中MS，5'DI，PDS，hAIT，TPOmRNA的表達(dá)，聯(lián)合應(yīng)用通過受體介導(dǎo)調(diào)控和通過組蛋白乙?；{(diào)控的兩種調(diào)節(jié)機(jī)制，增強(qiáng)上調(diào)功能基因表達(dá)的能力；增加甲癌細(xì)胞TG和ALP的分泌，誘導(dǎo)NIS和PDS在細(xì)胞漿和細(xì)胞膜的表達(dá)、增加其攝碘能力。臨床研究表明，RA能提高DTC病灶攝取<'13