早孕期弓形蟲感染對大鼠母胎界面MHC Ib和NK受體的影響.pdf

1、剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii）是人獸共患的弓形蟲病的病原體，也是人類TORCH綜合癥的病原體之一。孕期弓形蟲感染可以通過垂直傳播導致流產、早產、胎兒畸形等不良妊娠結局，其中早孕期弓形蟲感染對妊娠結局的影響最為嚴重。正常情況下，母胎界面處于一種復雜的免疫平衡狀態(tài)。雖然當前對于形成這種免疫平衡的詳細機制及參與的免疫分子并不完全清楚，但許多研究證明，其中母胎界面的MHC分子和NK細胞及其受體在維持正常妊娠過程中發(fā)揮至關重要的

2、作用。 已有研究證實，人滋養(yǎng)層細胞表達的HLA-G與母體蛻膜NK細胞表面的抑制性受體互為配體，二者的結合可有效抑制母體NK細胞對胚胎的免疫排斥反應，因此在維持正常妊娠中發(fā)揮重要的作用。本室前期研究已發(fā)現(xiàn)弓形蟲感染可下調人早孕期滋養(yǎng)層細胞表面HLA-G和人子宮蛻膜NK細胞抑制性受體的表達（待發(fā)表）。因此，本研究擬通過建立早孕期弓形蟲感染的動物模型，在體內探索以上分子在弓形蟲感染致不良妊娠結局中的作用機制。 RT.BM1和R

3、T1-E是表達在大鼠胎盤的MHC Ib類分子，與人HLA-E、HLA-G有諸多相似性，因此推測RT.BM1和RT1-E可能是通過與表達在蛻膜NK細胞表面的相應受體如抑制性受體NKG2A和活化性受體NKG2C及Ly49s3等結合調節(jié)蛻膜NK細胞的免疫活性，從而在大鼠正常妊娠的維系中發(fā)揮重要作用。迄今為止，關于大鼠正常妊娠過程中胎盤RT.BM1、RT1-E和蛻膜NK細胞受體NKG2A、NKG2C和Ly49s3的表達規(guī)律及其與弓形蟲感染造成不

4、良妊娠結局的相關性在國內外尚未見報道。 本研究在構建早孕期弓形蟲感染的大鼠模型的基礎上，檢測正常組和感染組大鼠胎盤RT.BM1、RT1-E和大鼠蛻膜NK細胞受體NKG2A、NKG2C、Ly49s3 mRNA的表達水平，首先探索上述分子在正常妊娠過程中的表達規(guī)律，進而研究早孕期弓形蟲感染對上述分子表達的影響，分析它們表達水平的改變與弓形蟲感染致不良妊娠結局的相關性，為探索早孕期弓形蟲感染導致不良妊娠結局的分子機制增添新的內容。

5、 將48只孕鼠隨機分為感染組和正常組，每組24只。感染組于妊娠第5天腹腔注射1×105個弓形蟲強毒株（RH株）速殖子/只，正常組不做任何處理。兩組于孕第9、13、15、17天分別處死6只孕鼠，無菌剖腹，觀察胎鼠情況，計錄死胎數及活胎數。分別檢測胎盤RT.BM1、RT1-E和蛻膜NKG2A、NKG2C及Ly49s3 mRNA的表達水平。結果：①正常組活胎數為204只，死胎數為3只，死胎率為1.4％；感染組活胎數為133只，死胎數為27

6、只，死胎率為16.9％，感染組死胎率明顯高于正常組，差異顯著（P<0.05）。②RT.BM1 mRNA：正常組第9、13、15天表達水平基本一致，第17天則明顯增高（P<0.01)；感染組的前三個時間點與正常組相比顯著增高（P<0.01）。③RT1-E mRNA：正常組在第9天低于后三個時間點（P<0.05），而感染組在第9、13、15天與正常組相比明顯上調，差異顯著（P<0.01）、（P<0.05）、（P<0.01）。④NKG2A m

7、RNA：第13天表達水平明顯高于另外三個時間點（P<0.05），而第9、15、17天之間無顯著差異；感染組的第9、13、15天均上調（P<0.05）、（P<0.01）、（P<0.01）且以中孕（第13、15天）最顯著。⑤NKG2C mRNA：第9、13天表達最高，第15、17天明顯下降，與前兩個時間點差異顯著(P<0.01)；感染組各時間點的表達均高于正常組，且第9天、13、17天感染組與正常組相比差異顯著（P<0.01，P<0.05，