早孕期弓形蟲感染對(duì)大鼠母胎界面MHC Ib和NK受體的影響.pdf

1、剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii）是人獸共患的弓形蟲病的病原體，也是人類TORCH綜合癥的病原體之一。孕期弓形蟲感染可以通過(guò)垂直傳播導(dǎo)致流產(chǎn)、早產(chǎn)、胎兒畸形等不良妊娠結(jié)局，其中早孕期弓形蟲感染對(duì)妊娠結(jié)局的影響最為嚴(yán)重。正常情況下，母胎界面處于一種復(fù)雜的免疫平衡狀態(tài)。雖然當(dāng)前對(duì)于形成這種免疫平衡的詳細(xì)機(jī)制及參與的免疫分子并不完全清楚，但許多研究證明，其中母胎界面的MHC分子和NK細(xì)胞及其受體在維持正常妊娠過(guò)程中發(fā)揮至關(guān)重要的

2、作用。 已有研究證實(shí)，人滋養(yǎng)層細(xì)胞表達(dá)的HLA-G與母體蛻膜NK細(xì)胞表面的抑制性受體互為配體，二者的結(jié)合可有效抑制母體NK細(xì)胞對(duì)胚胎的免疫排斥反應(yīng)，因此在維持正常妊娠中發(fā)揮重要的作用。本室前期研究已發(fā)現(xiàn)弓形蟲感染可下調(diào)人早孕期滋養(yǎng)層細(xì)胞表面HLA-G和人子宮蛻膜NK細(xì)胞抑制性受體的表達(dá)（待發(fā)表）。因此，本研究擬通過(guò)建立早孕期弓形蟲感染的動(dòng)物模型，在體內(nèi)探索以上分子在弓形蟲感染致不良妊娠結(jié)局中的作用機(jī)制。 RT.BM1和R

3、T1-E是表達(dá)在大鼠胎盤的MHC Ib類分子，與人HLA-E、HLA-G有諸多相似性，因此推測(cè)RT.BM1和RT1-E可能是通過(guò)與表達(dá)在蛻膜NK細(xì)胞表面的相應(yīng)受體如抑制性受體NKG2A和活化性受體NKG2C及Ly49s3等結(jié)合調(diào)節(jié)蛻膜NK細(xì)胞的免疫活性，從而在大鼠正常妊娠的維系中發(fā)揮重要作用。迄今為止，關(guān)于大鼠正常妊娠過(guò)程中胎盤RT.BM1、RT1-E和蛻膜NK細(xì)胞受體NKG2A、NKG2C和Ly49s3的表達(dá)規(guī)律及其與弓形蟲感染造成不

4、良妊娠結(jié)局的相關(guān)性在國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。 本研究在構(gòu)建早孕期弓形蟲感染的大鼠模型的基礎(chǔ)上，檢測(cè)正常組和感染組大鼠胎盤RT.BM1、RT1-E和大鼠蛻膜NK細(xì)胞受體NKG2A、NKG2C、Ly49s3 mRNA的表達(dá)水平，首先探索上述分子在正常妊娠過(guò)程中的表達(dá)規(guī)律，進(jìn)而研究早孕期弓形蟲感染對(duì)上述分子表達(dá)的影響，分析它們表達(dá)水平的改變與弓形蟲感染致不良妊娠結(jié)局的相關(guān)性，為探索早孕期弓形蟲感染導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局的分子機(jī)制增添新的內(nèi)容。

5、 將48只孕鼠隨機(jī)分為感染組和正常組，每組24只。感染組于妊娠第5天腹腔注射1×105個(gè)弓形蟲強(qiáng)毒株（RH株）速殖子/只，正常組不做任何處理。兩組于孕第9、13、15、17天分別處死6只孕鼠，無(wú)菌剖腹，觀察胎鼠情況，計(jì)錄死胎數(shù)及活胎數(shù)。分別檢測(cè)胎盤RT.BM1、RT1-E和蛻膜NKG2A、NKG2C及Ly49s3 mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果：①正常組活胎數(shù)為204只，死胎數(shù)為3只，死胎率為1.4％；感染組活胎數(shù)為133只，死胎數(shù)為27

6、只，死胎率為16.9％，感染組死胎率明顯高于正常組，差異顯著（P<0.05）。②RT.BM1 mRNA：正常組第9、13、15天表達(dá)水平基本一致，第17天則明顯增高（P<0.01)；感染組的前三個(gè)時(shí)間點(diǎn)與正常組相比顯著增高（P<0.01）。③RT1-E mRNA：正常組在第9天低于后三個(gè)時(shí)間點(diǎn)（P<0.05），而感染組在第9、13、15天與正常組相比明顯上調(diào)，差異顯著（P<0.01）、（P<0.05）、（P<0.01）。④NKG2A m

7、RNA：第13天表達(dá)水平明顯高于另外三個(gè)時(shí)間點(diǎn)（P<0.05），而第9、15、17天之間無(wú)顯著差異；感染組的第9、13、15天均上調(diào)（P<0.05）、（P<0.01）、（P<0.01）且以中孕（第13、15天）最顯著。⑤NKG2C mRNA：第9、13天表達(dá)最高，第15、17天明顯下降，與前兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)差異顯著(P<0.01)；感染組各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)均高于正常組，且第9天、13、17天感染組與正常組相比差異顯著（P<0.01，P<0.05，