孕期弓形蟲感染誘導的巨噬細胞亞群的偏移及其對不良妊娠的影響.pdf

1、目的：宮內感染導致胚胎畸形的病原生物通常稱為“TORCH”,弓形蟲(Toxoplasma gondii)被列為這五大病原體之首。母體的病原體可經血流通過胎盤在宮內感染胎兒,引起先天性弓形蟲病,使孕婦出現(xiàn)流產、死產、早產或增加妊娠合并癥,構成圍產期的一種嚴重的不良妊娠結局。宿主受弓形蟲感染的獲得性免疫應答,主要通過誘導T細胞和巨噬細胞產生具有多種生物活性的細胞因子(cytokines,CKS)發(fā)揮免疫調節(jié)作用。宿主在孕期主要是Th2應答占

2、優(yōu)勢的免疫環(huán)境,Mφ被誘導向M2型細胞偏移,主要功能是分泌抗炎性細胞因子,發(fā)揮免疫抑制功能。本研究探討了孕前與孕中期大鼠感染TgCtwh6(Chinese 1基因型)蟲株后,體內M1/M2的偏移及其差異,以及不同階段感染弓形蟲誘導的不良妊娠結局。本文旨在為我國優(yōu)勢基因型相關的先天性弓形蟲病的防治提供理論和實驗基礎。
　　方法：將SD雌鼠分為4組,每組10只:
　　①孕前感染組(inf-1);
　?、谠兄懈腥窘M(inf-

3、2);
　?、蹮o孕對照組(con-1);
　?、苡性袑φ战M(con-2)。
　　孕前感染組于合籠前一天,孕中感染組于孕第8天,分別腹腔注射1ml生理鹽水含2000個速殖子;對照組只注射等量生理鹽水。于妊娠第14天處死大鼠,取腹腔巨噬細胞、胎盤及胚胎。胎盤4％甲醛固定,石蠟包埋,HE染色。胚胎用熒光定量PCR做垂直傳播的檢測,并對獲得的胚胎數(shù)量進行統(tǒng)計學分析。巨噬細胞上清檢測尿素和NO;ELISA試劑盒檢測上清細胞因子I

4、L-10,IL-12,TNF-α,和TGF-β水平;用Western blotting檢測巨噬細胞內iNOS和Arg-1的表達;提取巨噬細胞RNA,用熒光定量PCR檢測Arg-1、iNOS、IL-10,IL-12,TNF-α,和TGF-β的mRNA轉錄水平。
　　結果：1、對感染后的大鼠持續(xù)靜脈采血21天,并未檢測到Toxo-DNA;大鼠在感染后沒有出現(xiàn)豎毛、弓背等機型期表現(xiàn),也未觀察到流產和死亡現(xiàn)象。
　　2、孕前感染組血

5、清NO水平最高;有孕對照組NO水平最低。Arg-1水平在孕前感染組最低;有孕對照組最高。M1型細胞因子iNOS等在孕前感染組表達水平高于其他組,其次是孕中感染組,有孕對照組最低。M2型細胞因子Arg-1等的表達水平在孕中感染組表達最高。
　　3、HE染色結果顯示,與孕中期感染相比,孕前感染組胎盤局部出現(xiàn)大量的、更嚴重的淋巴細胞浸潤。兩感染組的胚胎統(tǒng)計顯示,孕前感染組病理性胚胎發(fā)生率更高。
　　結論：孕前、孕中期用TgCtwh