免疫金標記技術快速檢測轉Bt基因棉抗性的研究.pdf

1、安徽農業(yè)大學碩士學位論文免疫金標記技術快速檢測轉Bt基因棉抗性的研究姓名：王清申請學位級別：碩士專業(yè)：農業(yè)昆蟲與害蟲防治指導教師：吳振廷20050601試紙條具體操作步驟如下：( 1 ) 取出試紙條恢復至室溫。( 2 ) 將有膠體金復合物端插入檢測樣品。( 3 ) 1 0 一2 0 m i n 判斷結果。( 4 ) 結果判斷a ．試紙條僅質控點( 加羊抗兔抗體) 出現(xiàn)一紫紅色點者判為正常( 陰性結果) 。b ．試紙條上出現(xiàn)兩個紫紅色點者

2、為陽性結果。C ．試紙條兩端都沒有紫紅色點出現(xiàn)者則為無效結果。說明此試紙條已經失效。試紙條靈敏度測試試驗結果表明，試紙條檢測極限為l O n g ／m l 。試紙條4 ℃干燥保存一個月后再進行試驗，結果穩(wěn)定。4 ．檢測8 t 毒蛋白免疫斑點金染色法模型的建立本文建立了用免疫斑點金染色法檢測B t 毒蛋白的檢測模型，其具體方法為在M i l I p o r e 孔徑為0 ．4 5 um 硝酸纖維素膜( N C ) ，畫出O ．8 c m

3、見方的格子，在格子中央點待測樣品l ul ，自然晾干。用0 ．O I Mp H 7 ．2 的P B S 洗滌后，將硝酸纖維素膜( N C膜) 置于封閉液中，室溫孵育3 0 m i n 后，分別用蒸餾水和0 ．O I M p H 7 ．2 的P B S 洗滌數(shù)次。再將硝酸纖維素膜浸泡于稀釋4 倍的金標抗體溶液中，置于室溫孵育3 0 m i n ，觀察結果：出現(xiàn)紫紅色為斑點陽性結果，無紫紅色斑點則為陰性結果。其檢測極限為1 6 n g ／m