可去除選擇標記的轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲玉米的研究.pdf

1、近年來,隨著轉(zhuǎn)基因作物品種的逐步推廣應(yīng)用和轉(zhuǎn)基因食品的商品化,轉(zhuǎn)基因作物對食品、環(huán)境和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的安全性,越來越受重視.除目的基因而外,轉(zhuǎn)基因操作中所使用選擇標記基因的安全性更是倍受關(guān)注.除了對選擇標記基因進行安全性評價以外,目前轉(zhuǎn)基因研究的一個熱點,即是通過共轉(zhuǎn)化、位點特異性重組、轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)法重新定位、MAT載體系統(tǒng)等方法,建立可去除選擇標記的基因轉(zhuǎn)化體系,在轉(zhuǎn)化篩選以后,去除選擇標記基因.該研究以攜帶Bt基因的pUBK質(zhì)粒和具有兩個轉(zhuǎn)

2、移DNA(T-DNA)結(jié)構(gòu)域的pCDMAR-Hyg質(zhì)粒為基礎(chǔ),通過酶切、連接構(gòu)建可去除選擇標記的雙T-DNA單子葉植物表達載體pCDMAR-USBK-Hyg,其中一個T-DNA結(jié)構(gòu)域含有外源抗蟲基因Bt,另一個T-DNA結(jié)構(gòu)域含有選擇標記基因Hpt.用這一雙T-DNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌后,通過轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌菌株與玉米胚性愈傷組織的共培養(yǎng),使雙T-DNA攜帶的抗蟲基因Bt和選擇標記基因Hpt共轉(zhuǎn)化玉米,經(jīng)潮霉素梯度濃度培養(yǎng)基篩選,從陽性克隆分化再