篩選陰道正常細菌治療奶牛慢性子宮內(nèi)膜炎的研究.pdf

1、摘要本研究共分六個部分1、陰道內(nèi)正常菌群的分離和鑒定2、慢性子宮內(nèi)膜炎細菌性病原的分離和鑒定3、體外拮抗試驗4、免疫原性的檢測5安全性檢測6病理模型的建立和治療試驗.(一)從經(jīng)產(chǎn)健康奶牛的陰道采集陰道壁粘液樣品，實驗室內(nèi)分離純化菌群，然后經(jīng)一系列形態(tài)學(xué)和生化鑒定，主要為表皮葡萄球菌、檸檬酸腸桿菌、嗜酸乳桿菌、大腸埃希氏菌、腸膜明串珠菌、多粘芽抱桿菌、短小芽泡桿菌、干燥奈瑟氏球菌、金黃色葡萄球菌。(二)采集奶牛慢性子宮內(nèi)膜炎內(nèi)容物，用選擇

2、性培養(yǎng)基篩選到鏈球菌、大腸桿菌和葡萄球菌各一株，該三株分離菌致病性不強，是條件性致病菌.鏈球菌血平板呈溶血葡萄球菌血漿凝固酶陽性。(三)陰道分離細菌濾液和全菌液對金黃色葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌均有不同程度的拮抗作用。濾液拮抗作用強度依次是BIAlC6ClC5B3、A3Ca、B5、C3、B2、凡。全菌液拮抗作用強弱依次是BI、^，、C6、A3、C5、CC3、Bz、C2、B5、Az、B3菌株B，的抑菌圈與其他菌株比較，差異顯著(P0.05

3、)參考抗生素抑菌能力的判定標準，三株子宮內(nèi)膜炎病原菌對B、A，的濾液和全菌液高度敏感，除B2、C3、AZ外，對其余分離菌株均中度敏感.(四)免疫原性檢測試驗表明，ABB5C5四株菌能增強家兔免疫功能.陰道灌注免疫家兔后，血清中IgAIgM含量呈上升趨勢，IgG無明顯變化。Al菌株免疫家兔后血清中Igm含量與其他三株菌和對照組比較差異顯著(P0.05)，而IgA較B.菌株和對照組差異顯著(P0.05).(五)對AlBB5C5進行安全性試驗

4、，證實四株分離菌是安全的。亞急性毒性試驗結(jié)果表明，分別用不同濃度的菌液首次口服10只小白鼠及以后連續(xù)飲用扣天，均對其無不良影響，繁育正常，剖檢也無特殊病變。按毒理學(xué)在食品安全方面的評價標準該四株分離菌對小白鼠可評定為實際無毒級LD50=5015000m叭g=(六)通過建立家兔陰道炎病理模型替代子宮內(nèi)膜炎，嗜酸乳桿菌A以每次2ml的劑量經(jīng)三次灌注沖洗用藥治療家兔陰道炎，治愈率分別為70%和87.5%e關(guān)鍵詞:陰道正常細菌奶牛慢性子宮內(nèi)膜炎

5、治療三、奶牛子宮內(nèi)膜炎與奶牛經(jīng)濟目前，奶牛生產(chǎn)中，子宮內(nèi)膜炎在乳牛生殖器官疾病中占有較大比例，也是引起乳牛不孕的主要原因之一。屢配不孕是阻礙養(yǎng)牛業(yè)發(fā)展的重要病癥。據(jù)調(diào)查，不孕癥在育齡黃牛群中發(fā)病率為26.3%。子宮內(nèi)膜炎是牛不孕癥的重要原因。在我國，不孕奶牛中子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病率占68.34%。瞿自明等19831985年對北京、上海、南寧、南寧等16個蘋市41個奶牛場調(diào)查的結(jié)果顯示，9754頭適齡奶牛中，就有1684頭發(fā)生子宮內(nèi)膜炎(17

6、.26%)，占不孕牛的68.34%東北地區(qū)奶牛場的奶牛子宮內(nèi)膜炎占奶牛病的2030%。而國外，如美國因奶牛不孕癥每年損失2.5億美元.英國報導(dǎo)不孕牛中約95%為子宮內(nèi)膜炎.前蘇聯(lián)報道牛子宮炎發(fā)病率占34.939.8%oAndriamanga等對幾個奶牛群進行了4年的研究，表明子宮炎的發(fā)病率為2040%oBarbu等報道，136頭產(chǎn)后不孕的牛中有70%為慢性隱性子宮內(nèi)膜炎。由此可見，牛(尤其是奶牛)子宮內(nèi)膜炎所造成的繁殖和經(jīng)濟損失是相當嚴

7、重的.一言蔽之，在臨床獸醫(yī)工作中，奶牛子宮內(nèi)膜炎治療和預(yù)防已顯得十分重要。四、推行“無抗奶”勢在必行目前世界上治療奶牛乳腺炎、子宮內(nèi)膜炎等疾病均使用抗生素，由此導(dǎo)致在牛奶中殘留抗生素(即“有抗奶，’)的問題長期難以得到解決?！坝锌鼓獭敝饕獊碜阅膛ｏ暳咸砑觿┲惺褂每股?，或治療奶牛臨床型、隱性乳房炎和奶牛子宮內(nèi)膜炎等疾病過程中使用青霉素16.71、四環(huán)素181、鏈霉素、慶大霉素、氯霉素、新霉素等，將這些使用過抗生素的奶牛所擠出的牛奶混入食

8、用牛奶中造成的后果是極其嚴重的。人們喝了含有抗生素殘留的牛奶，會造成人體生理紊亂、耐藥菌增加191，給疾病防治造成困難對抗生素過敏者，還會造成過敏性休克，甚至危及生命。另外，“有抗奶”中除了有抗生素殘留外，還可能帶有病菌、毒素及異常細胞等對人體有害的成分。我國南方出口到香港的牛奶，特別強調(diào)這些要求。現(xiàn)在，我國對此已開始重視，并作為創(chuàng)名牌的要求來抓.發(fā)達國家還對各奶牛場鮮產(chǎn)奶每月抽查一次，如發(fā)現(xiàn)殘留抗生素者罰，同時規(guī)定獸醫(yī)使用抗生素時必須

9、告知畜主不得將鮮奶出售食用的期限，否則一旦查出獸醫(yī)應(yīng)負責任。我國的廣州、上海和南京等地的奶牛場也開始重視抗生素使用的期限和定期檢查隱性乳房炎的發(fā)病情況。聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)和世界衛(wèi)生組織(WHO)建議，在奶牛接受抗生素治療停藥后至少3天(最好停藥57天)內(nèi)擠出的奶汁不直接作為食用的奶原料。如美國的食品和藥品局(FDA)規(guī)定，每毫升牛奶中的抗生素的含量不得超過0.006國際單位，使用抗生素后%小時內(nèi)的牛奶應(yīng)廢棄。我國已頒布的《食品衛(wèi)生