茶氨酸和茶氨酸合成酶活性的毛細管電泳檢測及酶學(xué)研究.pdf

1、　　本文主要在茶氨酸及其合成關(guān)鍵酶的檢測和初步純化等方面開展了一系列工作。　　首先研究了茶籽的培育條件，從不同組織中分離、提取茶氨酸合成酶，并初步探討一些理化因素對茶氨酸合成酶表達的誘導(dǎo)作用。通過制備丙酮粉，利用丙酮和硫酸銨沉淀法，從不同組織部位中提取茶氨酸合成酶。證實了丙酮粉粗酶液中，茶苗根中的茶氨酸合成酶活性約為茶籽苗和茶樹鮮葉的7.1倍，而其蛋白質(zhì)含量僅為后兩者的1/4。運用水楊酸浸泡、避光培養(yǎng)處理茶籽，茶苗表現(xiàn)出最高的茶氨酸合

2、成酶活性，說明避光和水楊酸對茶氨酸合成酶表達具有誘導(dǎo)作用?！　∪缓蠼⒘四z束電動力學(xué)毛細管電泳技術(shù)定量茶氨酸的新方法。試驗以2，4-二硝基氟苯為衍生化試劑，在50℃的pH9.5硼酸緩沖液中作用25min后可以得到較穩(wěn)定的在360nm處有最大吸收峰的衍生化產(chǎn)物。研究了影響毛細管電泳分離效果的主要因素，確立了毛細管電泳分離的最佳條件。檢測了不同茶樣中的茶氨酸含量，測定了茶氨酸定量方法的性能指標(biāo)。從而證實了毛細管電泳技術(shù)定量茶樣中茶氨酸的可

3、行性?！　∑浯我阅z束電動力學(xué)毛細管電泳技術(shù)定量茶氨酸為基礎(chǔ)，論文還首次建立了一套茶氨酸合成酶活性檢測的新方法。通過優(yōu)化茶氨酸得出合成酶最佳反應(yīng)體系。考察了酶反應(yīng)體系中可能影響毛細管電泳分離的各種因素。對茶氨酸合成酶純化液樣品進行活性檢測，驗證了茶氨酸合成酶毛細管電泳法分析的可靠性。并研究了茶氨酸合成酶初步純化液的部分酶學(xué)性質(zhì)：穩(wěn)定pH范圍為7.0-8.0以及酶的t1/2為15℃?！　⊥瑫r運用離子交換層析、凝膠過濾層析嘗試了茶氨酸合成

4、酶的進一步純化，最終純化倍數(shù)是丙酮粉粗酶液的42.4倍，另外，還篩選了茶氨酸合成酶的抑制劑，并初步探討了利用親和層析法純化茶氨酸合成酶的可行性?！　∽詈鬄榱松钊胙芯坎璋彼岷铣擅傅姆肿由飳W(xué)基礎(chǔ)，系統(tǒng)分析了自然界中存在的同樣可以實現(xiàn)茶氨酸的酶法合成的其它三種酶。來自于假單胞菌的谷氨酰胺合成酶已被證實可以以谷氨酸和乙胺為底物合成茶氨酸；在細菌體內(nèi)廣泛存在的γ-谷氨基甲酰胺合成酶可以催化谷氨酸和甲胺生成γ-谷氨基甲酰胺；大腸桿菌產(chǎn)生的γ-谷