分離哺乳動(dòng)物XY精子的初步研究.pdf

1、該研究的目的是探討影響精子分離的因素,初步建立起流式細(xì)胞儀分離哺乳動(dòng)物X精子和Y精子的程序和方法.采集回來(lái)用于實(shí)驗(yàn)的精液,經(jīng)過(guò)品質(zhì)評(píng)定后用精子稀釋液(TALP)稀釋,與Hoechst33342在35℃水浴中孵育染色60 min,染色結(jié)束后加入食物色素(FD&C＃40)著色去除死亡精子,利用流式細(xì)胞儀根據(jù)精子核DNA含量的差別將X精子和Y精子分離.結(jié)果發(fā)現(xiàn):在精子分離之前,對(duì)黃牛新鮮精液分別進(jìn)行直接保存、TALP稀釋保存、TALP+Hoe

2、chst33342染色保存,在0h、4h時(shí)活率沒(méi)有顯著差異(P>0.05),8h時(shí)TALP+Hoechst33342保存的一組活率最低(61％),與另外兩組差異顯著(P<0.05),24h時(shí)新鮮精液直接保存的活率最好(60%),與另外兩組差異極顯著(P<0.01);用山羊斷尾精子調(diào)試流式細(xì)胞儀,正確定向的斷尾精子達(dá)到69%,在FL2H上X精子和Y精子分峰情況良好,各自CV均為~1.0%,用標(biāo)準(zhǔn)Beads檢測(cè)CV達(dá)到了1.93%;山羊和水

3、?；罹尤旧珪r(shí),Hoechst33342濃度至少分別為30μg/ml和40μg/ml,才能將DNA飽和著色,經(jīng)過(guò)流式細(xì)胞儀分析XY精子DNA時(shí)呈現(xiàn)雙峰;山羊和水牛的新鮮精液平均精子活率為86%和80%時(shí),在10psi、20psi、30psi、40psi、50psi的鞘液壓力下分離之后,平均活率分別為69%、67%、56%、22%、8%和73%、49%、22%、6%、3%,分離后精子的活率隨著壓力的提高而下降;水牛精子分離之后,利用重分析