哺乳動(dòng)物核質(zhì)關(guān)系的研究.pdf

家兔具有繁殖力高,繁殖周期短,產(chǎn)仔率高,與一般的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物相比易于飼養(yǎng)和管理等優(yōu)點(diǎn),并且與嚙齒類相比更接近于靈長(zhǎng)類,是一種很好的模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,在發(fā)育生物學(xué)和生殖生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究中被廣泛使用.到目前為止,核移植的成功率仍非常的低,具體原因比較復(fù)雜,一直沒有得到圓滿的解答.其中核質(zhì)相容性的問題,即供核細(xì)胞的類型以及供核細(xì)胞的細(xì)胞周期是否能夠與去核卵母細(xì)胞質(zhì)相容,而使核物質(zhì)可以正常進(jìn)行重編程,一直為人們所關(guān)注.本文探討了以兔子胎兒成纖維細(xì)胞為供核細(xì)胞,在體外培養(yǎng)處理(血清饑餓處理法)對(duì)供核細(xì)胞發(fā)育周期的影響,以及對(duì)重構(gòu)胚的融合率、分裂率和著床情況進(jìn)行了比較研究.結(jié)果表明,當(dāng)培養(yǎng)基中血清含量由正常的10%降到0.5%時(shí),胎兒成纖維細(xì)胞中的G<,0>/G<,1>期細(xì)胞由正常培養(yǎng)條件下的73.2%明顯地增加到86%以上.用饑餓1-3天的細(xì)胞為供核細(xì)胞發(fā)現(xiàn):饑餓對(duì)供核細(xì)胞與去核卵母細(xì)胞的融合率有明顯的提高,但是不同的饑餓時(shí)間之間,其融合率并無(wú)顯著的差異.饑餓一天就可以明顯提高重構(gòu)胚的融合率和分裂率,饑餓3天的具有最好的著床效果.這說(shuō)明饑餓處理可以提高胚胎的發(fā)育能力.異種核移植是研究核質(zhì)關(guān)系的有效手段,同時(shí)也是動(dòng)物繁育和拯救瀕危動(dòng)物的途徑之一.異種核移植的成功率比同種間的核移植成功率低,這主要是由于卵母細(xì)胞質(zhì)中某些因子與異種核之間存在的兼容性和排斥性的問題,兼容性有利于異種胚胎的發(fā)育,而排斥性則有利于物種的繁殖隔離,對(duì)物種而言是保護(hù)其基因庫(kù)穩(wěn)定性的主要手段.檢測(cè)異種克隆胚中的線粒體變化是研究異種克隆機(jī)理的一個(gè)主要方法.本實(shí)驗(yàn)首次用電子顯微鏡觀察了異種細(xì)胞核移植鼠—兔重構(gòu)胚和大熊貓—山羊重構(gòu)胚的線粒體在發(fā)育過(guò)程中的動(dòng)態(tài)變化.同時(shí)作為對(duì)比,觀察了大熊貓肌肉細(xì)胞、山羊卵母細(xì)胞、鼠胚胎成纖維細(xì)胞和兔胚胎分裂球的早期發(fā)育階段線粒體的變化,發(fā)現(xiàn)異種重構(gòu)胚胞質(zhì)中的線粒體類型基本上是受體的,即卵母細(xì)胞的線粒體.