PCR法鑒別哺乳動物胚胎性別的研究.pdf

1、該實驗建立了用聚合酶鏈式反應(yīng)(PolymeraseChainReaction,PCR)技術(shù)體外擴增哺乳動物SRY特異序列鑒別哺乳動物胚胎性別的方法.依據(jù)牛、山羊、兔、豬等哺乳動物Sry基因高度同源性設(shè)計一對SRY引物,兩條引物均為22個堿基,對公牛的SRY特異的163bp序列進行體外擴增.從公、母牛的組織或血液提取基因組DNA,用作PCR擴增基因組DNA的模板,同時在立體顯微鏡下收集羊-兔異種克隆胚胎,先用0.145mol/LNaCl沖

2、洗2次,再移入20μL胚胎處理液中(10mmol/L Tris-HCl pH8.3,50mmol/L KCl,2mmol/LMgCl<,2>,0.45﹪ NP-40,0.45﹪Tween-20,0.1μg/μL蛋白酶K),將羊-兔異種克隆胚胎及其處理液在55℃水浴作用60min,然后將此胚胎溶解物直接作為PCR擴增胚胎DNA的模板.采用PCR擴增?；蚪MDNA最適條件分別擴增了黑白花奶牛9頭(♀6,♂3)、皖北黃牛11頭(♀3,♂8)、

3、波爾三羊3只(♀2,♂1)、兔4只(♀1, ♂3)和豬7頭(♀3,♂4)的基因組DNA.所有雄性樣品中均出現(xiàn)清晰可見的特異DNA擴增帶,而雌性樣品和空白對照中無擴增片段出現(xiàn).同時采用PCR擴增羊-兔異種克隆胚胎DNA最適條件擴增了15個羊-兔異種克隆胚胎DNA(4個胚胎的供體為公羊,11個胚胎的供體為母羊),所有以公羊為供體的羊-兔異種克隆胚胎樣品均出現(xiàn)清晰可見的特異DNA擴增條帶,而以母羊為供體的羊-兔異種克隆胚胎樣品和空白對照中無擴