荔枝體細(xì)胞胚胎發(fā)生及原生質(zhì)體培養(yǎng)的研究.pdf

1、荔枝(Litchi chinesis Sonn.)屬無患子科(Sapindaceae)荔枝屬(Litchi Sonn.),原產(chǎn)中國,是中國南方著名的亞熱帶常綠果樹.由于離體培養(yǎng)比較困難等原因,荔枝在生物技術(shù)領(lǐng)域的研究進(jìn)展緩慢.該研究旨在已有研究的基礎(chǔ)上,對不同荔枝品種花藥進(jìn)行胚性愈傷組織誘導(dǎo),并以此為基礎(chǔ)進(jìn)一步完善荔枝高頻體細(xì)胞胚胎發(fā)生與植株再生體系、建立和完善荔枝原生質(zhì)體培養(yǎng)再生體系,以期為荔枝的生物技術(shù)育種提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持.主

2、要研究結(jié)果如下:1.通過對16個(gè)品種的花藥和相同品種的不同外植體的誘導(dǎo),最終得到三月紅、妃子笑、水東、懷枝、掛綠、紅荔、三山尖葉荔、香山雞嘴荔、評砣等品種花藥的胚性愈傷組織,8個(gè)品種花藥的非胚性愈傷組織,得到由妃子笑幼胚誘導(dǎo)出的胚性愈傷組織,由三月紅的莖段和幼葉誘導(dǎo)出的非胚性愈傷組織.2.試驗(yàn)結(jié)果表明,胚性愈傷組織在MS+2.0mg/l 2,4-D+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖的培養(yǎng)基上能較好的增殖,在液體培養(yǎng)液中繼代培養(yǎng)5~

3、6代后轉(zhuǎn)入固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)2代(繼代周期為7天),能很好地保持愈傷組織的胚性.3.正交設(shè)計(jì)比較培養(yǎng)基組合表明,MS+0.5mg/L KT+0.1mg/L NAA+3g/L AC+30g/L蔗糖是比較適合荔枝胚性愈傷組織體胚誘導(dǎo)的培養(yǎng)基組合,在此培養(yǎng)基上成功誘導(dǎo)出水東和妃子笑兩個(gè)品種的體胚.4.經(jīng)過成熟老化的體胚可在無植物生物調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)上再生植株,現(xiàn)已得到水東和妃子笑兩個(gè)品種體胚的再生植株.成熟培養(yǎng)能促進(jìn)體胚的生長發(fā)育、提高再生植株的數(shù)

4、量.在成熟培養(yǎng)基中加入谷氨酰胺1600mg/L、蜂皇漿400mg/L、椰子汁100mg/L、水解酪蛋白500mg/L后,植株再率會有所提高.正交試驗(yàn)表明,5.0mg/LGA<,3>+0.1mg/LNAA的植物生長調(diào)節(jié)劑組合對荔枝體胚植株再生有一定促進(jìn)作用.5.繼代4~5次,培養(yǎng)4~6天的胚性懸浮系比較適合用于作為原生質(zhì)體分離的材料.1﹪的纖維素酶Cellulase Onzuka R-10和0.5﹪的果膠酶Pectolysae Y-23組

5、合分離原生質(zhì)體效果最好.荔枝的原生質(zhì)體在培養(yǎng)基MB+1.0mg/L ZT+1.0mg/L 2,4-D+0.2mg/L NAA+500mg/L谷氨酰胺+0.45mol/L葡萄糖+0.1mol/L蔗糖上能持續(xù)分裂,形成多細(xì)胞團(tuán).現(xiàn)已得到三山尖葉荔和香山雞荔的原生質(zhì)體的再生愈傷組織.6.論文對荔枝不同品種的胚性愈傷組織和再生植株的葉片進(jìn)行倍性檢測表明,水東和妃子笑的胚性愈傷組織和再生植株均為二倍體;三山尖葉荔和香山雞嘴荔的胚性愈傷組織是三倍體