白皮松和美國黃松組織培養(yǎng)及快繁技術研究.pdf

1、白皮松和美國黃松組織培養(yǎng)和微體快繁研究表明,在離體培養(yǎng)條件下,以白皮松成熟胚為材料,誘導出大量不定芽;以美國黃松成熟胚為外植體獲得了再生小植株,生根率提高到15%.初步探索出白皮松、美國黃松微體快繁的有效途徑.其主要結論如下:(1)胚是白皮松(Pinus bangeana)和美國黃松(Pinus ponderosa)微體快繁的最佳外植體;在組織培養(yǎng)前,切除胚根和其相連的部分—下胚軸,外植體的生長和不定芽的分化較好.(2)白皮松種子在55

2、℃水中浸泡30min,然后用自來水浸泡3-5天;美國黃松種子用55℃水浸泡10min后,用自來水浸泡2-3天.選用0.2%的KMnO<,4>溶液對白皮松種皮消毒30min,對美國黃松種皮消毒10min.對種皮消毒后,去掉種皮,經(jīng)70%乙醇漂沈20s,0.1%HgCl<,2>消毒8-10min,無菌水沖洗3-4次,于無菌條件下用解剖刀和鑷子剝去胚乳,取出成熟胚接種到培養(yǎng)基上,污染率低.(3)白皮松不定芽的誘導以MS為最佳培養(yǎng)基,不定芽的誘

3、導率達70%以上,繼代培養(yǎng)基仍以MS為基本培養(yǎng)基,不定芽的增殖和生長狀況良好.(4)美國黃松不定芽誘導以GD培養(yǎng)基誘導效果最佳;不定芽增殖選用1/2GD和1/2SH培養(yǎng)基,不定芽伸長選用GD和SH培養(yǎng)基;生根培養(yǎng)選用1/2GD和1/2SH,以1/2GD培養(yǎng)基為佳.(5)白皮松不定芽誘導采用6-BA 3.5mg·L<'-1>和NAA0.4mg·L<'-1>及IBA0.1mg·L<'-1>配合,不定芽的誘導率達到70%以上.(6)美國黃松采

4、用6-BA和NAA兩種配合并進一步縮小激素濃度梯度,6-BA0.5mg·L<'-1>-1.0mg·L<'-1>,NAA0mg·L<'-1>-0.5mg·L<'-1>時,不定芽的誘導率達到60%以上,在繼代培養(yǎng)過程中添加GA<,3>,不添加其他生長調節(jié)劑,促進了白皮松不定芽的伸長;采用NAA和GA<,3>組合,使美國黃松嫩稍生根率從2%提高到15%.(7)在適當?shù)呐囵B(yǎng)基和激素配比條件下,適當提高蔗糖濃度,可作為促進白皮松子葉上不定芽發(fā)生的

5、一個重要因素.(8)在初代培養(yǎng)基中添加活性炭不利于不定芽的誘導和分化;繼代培養(yǎng)基中加入1%的活性炭,促進了不定芽的生長;在生根培養(yǎng)基中加入適量活性炭能促進根的生長.(9)美國黃松嫩稍在1/2GD和1/2SH培養(yǎng)基上均能生根,美國黃松的嫩稍在1/2GD培養(yǎng)基上,NAA1.0 mg·L<'-1>,GA<,3>0.5mg·L<'-1>時的生根率最高,達到16.7%.在1/2SH培養(yǎng)基上,當NAA0.5mg·L<'-1>和GA<,3>0.5mg