陜西省常見四種實蠅的分子鑒定.pdf

1、該文利用RAPD技術和PCR方法在國內首次對實蠅的分子鑒定進行了研究,旨在找到一種能準確、快速鑒定實蠅的方法,主要結果如下:1、利用目前國內提取干標本DNA的多種方法,如CTAB法、SDS法等試驗結果表明,常規(guī)保存條件下,保存一年左右的干標本很難進行DNA的提取,不管采用何種方法,大多數(shù)標本均不能提取到DNA;僅少數(shù)保存比較好的干標本,可以提取出DNA并進行PCR擴增.而利用CTAB法、SDS法等方法對絕大多數(shù)保存在超低溫冰箱中的干標本

2、都能提取到足量的DNA.2、在多次篩選試驗的基礎上,優(yōu)化了實蠅的RAPD體系,建立了一套穩(wěn)定的實蠅鑒定RAPD反應體系,為今后采用分子生物學技術進行實蠅鑒定奠定了一定的基礎.3、從69條引物中篩選出S361、S67和S252可以對南瓜實蠅、具條實蠅和三點棍腹實蠅進行區(qū)別鑒定;S112引物可以對具條實蠅、桔大實蠅和三點棍腹實蠅進行區(qū)別鑒定;S126和S134可以對具條實蠅和三點棍腹實蠅進行區(qū)別鑒定,S83可以對南瓜實蠅的雌性和雄性進行鑒定

3、.4、利用3條擴增結果穩(wěn)定、清晰的引物,每種實蠅用7個個體對4種實蠅的種內穩(wěn)定性進行了研究,結果表明南瓜實蠅、具條實蠅、桔大實蠅和三點棍腹實蠅的種內平均相似系數(shù)分別為0.551、0.538、0.373、0.778,從相似系數(shù)可以看出三點棍腹實蠅種內最穩(wěn)定,其次為南瓜實蠅和具條實蠅,桔大實蠅種內分化最大.5、用S61、S83、S107、S264、S265、S266、S271、S274、S275、S276、S1142、S合引等12條引物,每

4、種實蠅用1個個體,對4種實蠅進行擴增,根據(jù)DICE遺傳距離聚類結果表明南瓜實蠅和具條實蠅先聚在一起,然后與三點棍腹實蠅聚在一起,最后再與桔大實蠅聚在一起.用S61、S107、S126、S275、S1142等5條引物,每種實蠅用3個個體,對4種實蠅進行擴增,用DICE和NEI遺傳距離聚類結果表明南瓜實蠅和具條實蠅先聚在一起,再與桔大實蠅聚在一起,最后它們3個與三點棍腹實蠅聚在一起.這與傳統(tǒng)分類所提出的親緣關系完全一致.6、通過擴增ITS<

5、,1>片段,成功的對4種實蠅進行了鑒定,其中南瓜實蠅擴增出的條帶大小為650bp左右,具條實蠅擴增出的條帶大小為640bp左右,桔大實蠅擴增出的條帶大小為1010bp左右,三點棍腹實蠅擴增出的條帶大小為773bp左右,該方法比RAPD方法用的時間更短,整個過程可以在30個小時內完成,重復性好,可以在不同實驗室,不同PCR儀上進行重復.該論文在國內首次利用兩種分子標記對實蠅進行了鑒定,利用這兩種方法對實蠅進行鑒定快速、準確,從理論上來講,