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文檔簡介
1、黑龍江和云南兩省分別是中國正季和反季節(jié)南瓜生產的大省,近年來隨著栽培面積的不斷擴大,病毒病害也日益加重,引起嚴重的產質和質量損失.該研究通過從云南、黑龍江兩省采集南瓜病樣,確定引起兩省南瓜病毒病害的主要病毒病原,分離克隆主要病毒病原的外殼蛋白基因,并對兩省的部分南瓜材料進行了抗主要病毒病原的初步篩選,為南瓜的抗病毒育種和病毒病的有效防控奠定基礎.該項研究采集了南瓜病毒病樣品191份,其中黑龍江省149份,云南省42份,采樣涉及了兩省南瓜
2、生產的主要區(qū)域.應用電子顯微鏡負染法和超薄切片法觀察病原粒體形態(tài)及細胞病理學特征;利用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法中的雙抗體夾心ELISA(DAS-EILSA)、間接ELISA(I-ELISA)、三抗體夾心ELISA(TAS-ELISA)以及反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)、免疫捕捉PCR(IC-PCR)方法鑒定了采集樣品中的病毒種類;對被確定為南瓜主要病毒病原的外殼蛋白(CP)基因進行了PCR擴增,克隆到pGEM-T載體并進行
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