玉米品種分子測試技術(shù)體系及其應(yīng)用.pdf

1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文玉米品種分子測試技術(shù)體系及其應(yīng)用姓名：李曉輝申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：作物栽培學(xué)與耕作學(xué)指導(dǎo)教師：李文華2002.5.1乍j 睨辮 A B S T R A C T 2 0 0 2 ．6A B S T R A C TT h eg e n u i n e n e s s a n dp u r i t yt e s to f s e e d i si m p o r t a n t o nm a i z e ( 2 e

2、a m a y s L ．) p r o d u c t i o n ．W i t ht h ed e v e l o p m e mo f m a i z eb r e e d i n ga n ds e e dt r a d e ，t h ep r o t e c t i o no f b r e e d e r ’s r i g h t i sg r a d u a l l yr e c o g n i z e d ．D N Af

3、 i n g e r p r i n t i n ga p p r o a c h c a l lb eu s e dt oi d e n t i f yt h e d i s t i n c t n e s sa n du n i f o r m i t y o f t h ev a r i e t yr a p i d l y a n d e x a c t l ga n dc o u l d h a v eas i g n i f

4、 i c a n t s e n s e o f fh y b r i ds e e dp u r i t yt e s ta n d n e w v a r i e t yp r o t e c t i o n ．T h i sp a p e re s t a b l i s h e dam o l e c u l a r t e c h n i q u e o f t e s t i n gf o r m a i z e s e e

5、 d p u r i t y b a s e d 0 n S S Rm a r k e r s ，w h i c h i n c l u d e d D N Am o l e c u l a r d e t e c t i n ga p p r o a c h ．c o r e p r i m e r s u s e d i n P e R ( P o l y m e r a s eC h a i n R e a c t i o n )

6、 ，D N A f i n g e r p r i n t i n gd a t a b a s e o fe l i t e m a i z e h y b r i d s a n d ’b i o m e t r i c a l a n a l y s i s m e t h o d ．W i t h t h e r a p i d D N Ae x t r a c t i n gp r o c e d u r ef r o ms

7、i n g l ek e r n e l ，t h em o l e c u l a r t e c h n i q u e c o u l d b ee f f e c t i v e l ye x p l o i t e df o rh y b r i ds e e dp u r l t yt e s to f m a i z e ．T h er e s u l t sw e r e s u m m a r i z e d a sf

8、 o I l o w s ：1 ．T h em o l e c u l a r t e c h n i q u e w a se s t a b l i s h e db a s e do nS S R m a r k e r S ．w h i c hi n c l u d e dP C Rs y s t e m ，p o l y a c r y l a m i d eg e le l e c t r o p h o r e s i s

9、 ，s i l v e rs t a i n i n gm e t h o d ，t h e b i o m e t r i c a la n a l y s i so fb a n dp r o f i l e ，e t c ．2 ．S i x t y - s i x o u to f9 8p a i r so fS S Rp r i m e r s w e r es e l e c t e d ，w h i c h g a v ec

10、 l e a r , s t a b l e ．r e p e a t e d ，p o l y m o r p h i c a m p l i f i c a t i o n p r o f i l e s i n t h e s a m p l eo f2 1 i n b r e d l i n e s ．6 6 p r i m e r sp r o d u c e d 2 5 1 p o l y m o r p h i c a l

11、 l e l e s ．T h ea v e r a g en u m b e r o f a l l e l e sp e rS S R l o c iW a S 3 ．8 0w i t har a n g e f r o m 2 t o 9 ．T h e s i z e o ff r a g m e n t s r a n g e d f r o m 6 3 t o 5 0 2 b p ．T h e P o l y m o r p

12、h i cj n f o r m a t i o nC o n t e n t ( P I e ) f o rt h eS S Rl o c i v a r i e df r o m0 ．1 4 9 t o 0 ，8 0 0 w i t h a na v e r a g eo f0 ．515 ．T h ee x p e r i m e n t s h o w e d t h a t7p r i m e r sp o s s e s s

13、i n ga h i g h e rl e v e lo f p o l y m o r p h i s mc o u l db eu s e d t oi d e n t i f y t h e2 l i n b r e d s ．3 ．T h ee x p e r i m e n t e s t a b l i s h e dD N A f i n g e r p r i n t i n gd a t a b a s eo f 9

14、4e l i t em a i z ei n b r e dl i n e su s e dp r e d o m i n a n t l yi nC h i n a ．6 6 p r i m e r §p r o d u c e d2 9 5 a l l e l e sw i t ht h e a v e r a g eo f 4 ．4 7 p e rl o c ia n dar a n g ef r o m2t o 1 9

15、 ．T h es i z e o f f r a g m e n t sv a r i e df r o m6 3t o5 0 2 b p ，a n dt h eP I ev a l u er a n g e df r o m 0 ．0 4 0t o0 ．8 7 5w i t h a na v e r a g e o f O ．5 1 6 ．4 ．T w e n t y 。n i n eo u to f 6 6p 8 i r so f

16、p r i m e r sw e r ef u r t h e rs e l e c t e d ，w h i c hg a v ev e r yc l e a r ．s t a b l e 。r e p e a t e d ，p o l y m o r p h i ca m p l i f i c a t i o np r o f i l e s ．2 9p r i m e r sp r o d u c e dl1 6a l l e

17、l e sa m o n g 2 6i n b r e d sr a n g e df r o m2t o6w i t ht h ea v e r a g eo f 4 ．0 0 ．T h es i z eo f a l l e l e sr a n g e df r o m6 3t o5 0 2 b p ，a n dt h eP I C v a l u ef o rl h e S S R l o c iv a r i e df r o

18、 m 0 ．0 3 8t o0 ．7 6 7w i t ha na v e r a g e o f 0 ．5 4 5 ．5 ．T h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h e r ew e r ef o u ra m p l i f i e dp r o f i l e sb e t w e e n t h eh y b r i da n di t sp a r e n t a ll i n e s ，

19、i n c l u d i n gm a l e ，f e m a l e a n d h y b r i d s ，o f w h i c ht h e p a r e n t sw e r e t h em a i n o n e s ．6 ．T h er a p i dD N A e x t r a c t i n gp r o c e d u r ef r o m s i n g l e k e r n e lw a se s

20、t a b l i s h e d i n c l u d i n gq u i c k l y m i l l i n g e m b r y o ，c e n t r i f u g e l i z i n g - m i l l e dl i q u i d ，a b s o r b i n g t o p c l e a rl i q u i d ，e t c ．7 ．T h er e s u l t ss h o w e d

21、t h a t 1 3h y b r i d s c o u l db e d i s t i n g u i s h e db y S S R f i n g e r p r i n t i n gp a t t e r n sa m p l i f i e db y2t o3 p r i m e r sa n d s t a t i s t i c a la n a l y s i s ，i n f o r m i n gt h a

22、 tt h eD N A d e t e c t i n 2t e c h n i q u ee s t a b l i s h e dc o u l d b ee f f e c t i v e l ye x p l o i t e df o r h y b r i ds e e dp u r i t yt e s to f m a i z e ．K e y w o r d ：M a i z e ；M o l e c u l a r