基于SSR的棉花品種分子檢測技術(shù)體系的建立與應(yīng)用.pdf

1、棉花優(yōu)良品種是保證棉花優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、可持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵性因素，而品種真實性和純度是種子質(zhì)量的重要指標(biāo)，對作物產(chǎn)量及品質(zhì)具有直接的影響。隨著品種數(shù)量的增多，田間表型農(nóng)藝性狀鑒定方法已難以滿足快速、準(zhǔn)確鑒定品種質(zhì)量的需求。隨著分子標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展，分子標(biāo)記檢測技術(shù)可以滿足農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中不同條件下品種鑒定的需要。本研究以SSR標(biāo)記技術(shù)為基礎(chǔ)，結(jié)合種子監(jiān)管工作實際，通過創(chuàng)新DNA快速提取方法、確定用于分子檢測的核心SSR引物、明確電泳檢測技術(shù)平臺、確定棉

2、花品種純度和真實性鑒定方法建立一套簡便、經(jīng)濟、準(zhǔn)確而高效的棉花品種分子標(biāo)記鑒定技術(shù)體系。該技術(shù)體系對保證棉花種子質(zhì)量安全具有重要意義。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴通過SSR引物多態(tài)性篩選確定了26對用于棉花品種分子檢測的核心SSR引物。核心SSR引物覆蓋棉花26條染色體，每對引物擴增的譜帶帶型數(shù)目最少為3種，最多11種，平均每對引物5.62種。⑵通過比較變性PAGE和非變性PAGE兩種銀染檢測方法，發(fā)現(xiàn)變性PAGE銀染檢測法能檢測

3、出分子標(biāo)記位點真實的等位變異，而且條帶清晰，結(jié)果可靠，適合用于對等位變異要求較高的檢測分析如品種真實性鑒定、個體親緣關(guān)系鑒定等；非變性PAGE銀染檢測法操作相對簡單，成本低而且檢測通量高，雖然有非特異條帶的存在，但不影響個體分子標(biāo)記基因型的鑒別，該方法適合高通量分析分子標(biāo)記基因型如品種的純度鑒定、分子遺傳多樣性研究等。⑶通過研究核心SSR引物在棉花品種分子水平上的非純混雜類型發(fā)現(xiàn)棉花品種純度在分子水平上主要表現(xiàn)為三種混雜類型：非純SSR

4、位點多而且異型帶集中于極少數(shù)單株的類型。具有該非純類型的品種在生產(chǎn)上應(yīng)屬于具有少量混雜的高代品種。非純SSR位點較少但異型帶隨機分布的類型。具有該非純類型的品種在生產(chǎn)上應(yīng)屬于選育世代不足的品種。Ⅲ：非純 SSR位點多且?guī)缀趺總€單株個體都存在異型帶的類型。具有該非純類型的品種在生產(chǎn)上應(yīng)屬于選擇世代較低的育種材料，其SSR位點一致性和單株個體一致性都較差，表型性狀極不穩(wěn)定。⑷結(jié)合田間表型性狀鑒定結(jié)果進行棉花品種真實性判定方法研究，研究明確了

5、利用26對核心SSR引物鑒定棉花品種典型單株個體的方法；明確利用典型單株個體建立品種的指紋圖譜；確定了棉花品種真實性判定規(guī)則：若受檢樣品和對照樣品的相似系數(shù)為1，則可判定受檢樣品和對照樣品是相同品種㈩若受檢樣品和對照樣品的相似系數(shù)介于1和0.98之間，則可判定受檢樣品和對照樣品是相似品種㈩若受檢樣品和對照樣品的相似系數(shù)〈0.98，則可判定受檢樣品和對照樣品是不同品種。⑸將棉花品種分子檢測技術(shù)體系成功應(yīng)用于山東省棉花區(qū)域試驗管理和棉花品種