SSR分子標(biāo)記在雜交水稻品種純度鑒定中的應(yīng)用研究.pdf

1、本研究以內(nèi)5優(yōu)8015、Y兩優(yōu)689、Ⅱ優(yōu)7954、錢優(yōu)1號、株兩優(yōu)06、浙優(yōu)12、浙優(yōu)18、春優(yōu)84等8個雜交稻品種為試驗材料，每個品種種子均分別來至上海、江西、海南、廣西、江蘇等5個制種基地，探討SSR分子標(biāo)記在雜交水稻品種純度快速鑒定中的應(yīng)用，主要結(jié)論如下：
　　 ⑴通過對水稻種子DNA快速提取方法的改進(jìn)，優(yōu)化原有提取方法中的關(guān)鍵步驟，確定不同雜交水稻品種種子的最佳DNA快速提取方法:8個品種種子提取液最佳浸泡時間不同，內(nèi)

2、5優(yōu)8015、Ⅱ優(yōu)7954、錢優(yōu)1號、浙優(yōu)12、浙優(yōu)18等5個品種種子的最佳浸泡時間均為12h，但Y兩優(yōu)689、株兩優(yōu)06、春優(yōu)84等3個品種種子需20 h。此外，8個雜交稻品種種子提取物第一步離心均以15 min為最佳條件。
　　 ⑵對原有PCR擴增體系進(jìn)行優(yōu)化，確定各品種純度檢測的最優(yōu)PCR擴增體系(10μl)。內(nèi)5優(yōu)8015、Ⅱ優(yōu)7954、錢優(yōu)1號、浙優(yōu)12、浙優(yōu)18等5個品種的PCR反應(yīng)體系:Mix5μl, DNAlμl

3、, Forward primer0.25μl, Reverse primer0.25μl, H2O3.5μl;Y兩優(yōu)689、株兩優(yōu)06、春優(yōu)84等3個品種純度檢測的PCR反應(yīng)體系:Mix5μl，DNA1.5μl, Forward primer0.25μl, Reverse primer0.25μl, H2O3μl。
　　 ⑶根據(jù)國家水稻品種鑒定DNA指紋方法推薦的24對SSR引物分別對內(nèi)5優(yōu)8015、Y兩優(yōu)689、Ⅱ優(yōu)7954、

4、錢優(yōu)1號、株兩優(yōu)06、浙優(yōu)12、浙優(yōu)18、春優(yōu)84等8個雜交稻品種DNA進(jìn)行PCR擴增，篩選出每個品種特異性條帶最明顯、整體效果最佳的引物作為標(biāo)準(zhǔn)圖譜的構(gòu)建。通過對這8個雜交稻品種種子進(jìn)行SSR分子標(biāo)記純度鑒定，結(jié)果如下:內(nèi)5優(yōu)8015、Y兩優(yōu)689、Ⅱ優(yōu)7954、錢優(yōu)1號、株兩優(yōu)06、浙優(yōu)12、浙優(yōu)18、春優(yōu)84等8個雜交稻品種的平均純度分別是96.3％、97.6％、96.3％、96.1％、96.9％、98.6％、98.2％、97.1

5、％。
　　 ⑷以上8個雜交稻品種分別在上海、江西、海南、廣西、江蘇進(jìn)行田間小區(qū)鑒定，在植株幼苗期至成熟期，通過對植株的典型性狀進(jìn)行觀察，將各品種中的異（雜）株區(qū)分，田間純度鑒定結(jié)果如下:內(nèi)5優(yōu)8015、Y兩優(yōu)689、Ⅱ優(yōu)7954、錢優(yōu)1號、株兩優(yōu)06、浙優(yōu)12、浙優(yōu)18、春優(yōu)84等8個雜交稻品種平均純度分別是97.7％、98.4％、98.3％、97.7％、98.0％、98.9％、99.0％、98.0％。
　　 ⑸通過優(yōu)化