規(guī)模化羊場(chǎng)細(xì)菌多重感染的病原分析與生物安全體系的實(shí)施.pdf

1、近年來，受市場(chǎng)需求的刺激，養(yǎng)羊業(yè)得到迅速發(fā)展。養(yǎng)殖方式從放牧轉(zhuǎn)變?yōu)樯犸暈橹鳎s化程度逐漸增長(zhǎng)。然而，隨著集約化程度增高，養(yǎng)殖密度升高，疫病的發(fā)生和傳播的頻率也日益增加。養(yǎng)羊業(yè)發(fā)展較晚，疫病防控體系不完善，飼養(yǎng)管理落后，更增加了疫病發(fā)生發(fā)展的可能性。規(guī)?；驁?chǎng)疾病主要是一些傳染性病原。其中細(xì)菌性疫病始終是難以控制的問題。因此，亟需一套科學(xué)的生物安全體系作為規(guī)?；驁?chǎng)健康發(fā)展的保障。
　　2013年山東臨沂、濟(jì)寧、萊蕪、棗莊4地區(qū)大

2、型規(guī)?；驁?chǎng)相繼出現(xiàn)以呼吸道疾病為主要特征的疫病，給養(yǎng)殖戶帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。此次疫病的流行較為嚴(yán)重，發(fā)病急，死亡率高，臨床癥狀和剖檢變化較為復(fù)雜，與一般單一病原感染有所不同。為探明其原因，本研究對(duì)細(xì)菌多重感染在羊群疫病發(fā)生和流行中的作用做了較全面的分析和探索。
　　本研究共分為三部分:
　　第一部分規(guī)?；驁?chǎng)細(xì)菌性病原檢測(cè)與多重感染狀況分析
　　從送檢的68只病死羊中共分離出128株、5種病原菌。通過病原的分離培養(yǎng)、

3、染色鏡檢、生化試驗(yàn)測(cè)定發(fā)現(xiàn)病原菌主要為鏈球菌(32/128，25％)、肺炎雙球菌(13/128，10.2％)、肺炎克雷伯菌(30/128，23.4％)、綠膿桿菌(36/128，28.1％)、糞腸球菌(17/128，13.3％)。對(duì)多重感染率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)感染率為29.4％，二重感染率為54.4％，三重感染率為14.7％，四重感染1.5％，其中以綠膿桿菌感染率最高為49.3％。尤其是以肺炎克雷伯菌和綠膿桿菌感染為主，由此可見綠膿桿

4、菌是感染的主體。
　　用分離出來的致病菌進(jìn)行動(dòng)物攻毒試驗(yàn)。通過動(dòng)物攻毒試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，接種12h后，各試驗(yàn)組小白鼠均有呆滯、呼吸困難、尾部發(fā)紺、活動(dòng)減少、被毛逆立、采食減少等癥狀，而對(duì)照組小白鼠表現(xiàn)正常。每組死亡小鼠體內(nèi)都能分離到相對(duì)應(yīng)的分離菌，說明5株分離菌為致病菌。其中致病力最強(qiáng)的病原菌是綠膿桿菌，接種24小時(shí)內(nèi)全部死亡。
　　第二部分主要病原的系統(tǒng)進(jìn)化分析和藥物敏感試驗(yàn)的研究
　　將自4個(gè)地區(qū)分離到的的致病性最強(qiáng)的4株

5、綠膿桿菌分別命名為PA-L-1、PA-J-1、PA-W-1、PA-Z-1，進(jìn)行16SrRNA基因序列測(cè)序，將其4個(gè)分離株與GenBank中登錄的PA標(biāo)準(zhǔn)菌株通過DNAStar進(jìn)行同源性分析，同源性為98.0％～99.7％，核苷酸序列之間同源性為98.1％～99.7％ PA-L-1與PA-J-1之間同源性更近，與其他兩株稍有差異。這種差異可能引起菌株對(duì)藥物的敏感性發(fā)生變化。
　　根據(jù)查閱資料，選用15種標(biāo)準(zhǔn)菌敏感藥物，用紙片法對(duì)分離

6、的菌株進(jìn)行敏感性試驗(yàn)，結(jié)果表明，4株分離菌對(duì)阿米卡星均具有較強(qiáng)敏感性，對(duì)青霉素、氨芐西林、鏈霉素和多西環(huán)素菌具有耐藥性。菌株出現(xiàn)一定的耐藥性。PA-L-1和PA-J-1耐藥性極為相似，對(duì)頭孢哌酮極敏感;差異表現(xiàn)在PA-W-1對(duì)恩諾沙星，氧氟沙星和妥布霉素極敏感;而PA-Z-1對(duì)恩諾沙星和氧氟沙星極敏感。在藥物敏感程度上存在差異性。
　　第三部分規(guī)模化羊場(chǎng)生物安全體系的實(shí)施
　　本研究中生物安全體系的建設(shè)是貫徹對(duì)疾病“預(yù)防為主