水稻內(nèi)生菌OsiSh-10的分離及其抗稻瘟病與促植物生長的研究.pdf

1、水稻稻瘟病是一種由梨孢霉菌（Phyricularia grisea）引起的嚴(yán)重危害水稻產(chǎn)量的真菌性病害，其防治手段主要依賴于化學(xué)農(nóng)藥及抗性育種，然而致病菌新生理小種的頻繁出現(xiàn)和化學(xué)農(nóng)藥帶來的環(huán)境破壞，導(dǎo)致我們迫切需要一種可持續(xù)的、環(huán)保的手段來防治稻瘟病。內(nèi)生放線菌可以通過與病原菌競爭生存空間和營養(yǎng)物質(zhì)如碳源、氮源、磷或鐵來抑制病原菌的生長，此外其產(chǎn)生的抗生素和其他生物活性物質(zhì)可以直接殺害病原菌或通過促進(jìn)植物生長間接提高宿主植物的抗病性。

2、本文從稻瘟病感病情況不同的水稻中分離得到并鑒定了一株拮抗內(nèi)生菌Streptomeces albus OsiSh-10，分析回接OsiSh-10至水稻內(nèi)后其對(duì)水稻稻瘟病病情的影響，并探索了該菌所產(chǎn)代謝物對(duì)植物生長的影響，旨在為日后水稻稻瘟病內(nèi)生菌防治的開發(fā)奠定理論基礎(chǔ)。主要的研究內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　1、本論文通過表面消毒結(jié)合五種分離培養(yǎng)基（WA、TWYE、MS、ISP4、HV）的分離方法，對(duì)15天和80天的感稻瘟病及未感稻瘟病的谷

3、梅4號(hào)和湘矮早7號(hào)水稻的內(nèi)生放線菌進(jìn)行分離。分離結(jié)果顯示：在15天幼苗期時(shí)，感病谷梅4號(hào)內(nèi)生放線菌出菌率為0.158，明顯高于未感病谷梅4號(hào)0.051的出菌率，感病湘矮早7號(hào)內(nèi)生放線菌出菌率0.097也高于未感病湘矮早7號(hào)出菌率0.07，而在80天成熟期時(shí)，出菌情況剛好與15天幼苗期結(jié)果相反，感病谷梅4號(hào)和感病湘矮早7號(hào)放的內(nèi)生放線菌出菌率分別低于未感病相應(yīng)水稻品種的內(nèi)生放線菌出菌率。利用平板對(duì)峙法篩選出一株對(duì)稻瘟病菌拮抗效果最明顯的菌

4、株并命名OsiSh-10，并根據(jù)形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化、16S rDNA序列比對(duì)及進(jìn)化樹構(gòu)建鑒定OsiSh-10菌株屬于白色鏈霉菌(Streptomyces albus)。
　　2、以三種稻瘟病菌生理小種為對(duì)象，利用平板對(duì)峙法進(jìn)一步研究 OsiSh-10拮抗稻瘟病菌的能力，發(fā)現(xiàn) OsiSh-10對(duì)三者均有較強(qiáng)的拮抗能力，其中最大的抑菌距離達(dá)21 mm，最大菌絲抑制率達(dá)59.1％，顯示OsiSh-10菌株對(duì)稻瘟病菌有顯著的拮抗

5、效果；利用平板定性法對(duì)OsiSh-10菌株產(chǎn)生的與抗病相關(guān)的活性物質(zhì)進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)該菌不產(chǎn)纖維素酶、半纖維素酶、幾丁質(zhì)酶及氰化氫，但能產(chǎn)鐵載體；有機(jī)試劑萃取液的拮抗實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該菌能在PDA培養(yǎng)基中分泌某些極性較大的水溶性拮抗物質(zhì)；大田體內(nèi)抗病實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：OsiSh-10菌株孢子液噴灑葉片一次的水稻葉瘟病情指數(shù)37.7%和噴灑二次的水稻葉瘟病情指數(shù)31.01%均低于包埋組（55.73%）和空白組（46.75%）的水稻葉瘟病情指數(shù)，表明菌株

6、孢子液噴灑于水稻葉面可以對(duì)葉瘟起到明顯的控制效果，且兩次噴灑效果更好。
　　3、通過將OsiSh-10菌株與擬南芥垂直培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：OsiSh-10菌塊置于擬南芥根上方可以促進(jìn)初生根的伸長，而OsiSh-10菌塊置于擬南芥根下方則抑制初生根伸長，增強(qiáng)側(cè)根的生長。對(duì)OsiSh-10菌株分泌的與植物促生作用相關(guān)的活性物質(zhì)進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)該菌株能產(chǎn)生鐵載體、ACC脫氨酶、溶磷因子及IAA，通過LC-MS分析發(fā)現(xiàn)OsiSh-10菌株在PD