微生物菌劑對生姜土壤養(yǎng)分和菌落結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、生姜古名薹，為姜科多年生草本科植物。姜不僅是我國傳統(tǒng)的調(diào)味蔬菜，而且也是一種十分重要的經(jīng)濟作物。由于長期種植，導(dǎo)致有害病原微生物不斷累積，土傳病害加重，嚴重影響了生姜產(chǎn)量和質(zhì)量。
　　以云南煙草赤星病原菌（Alternaria alternate）、生姜莖腐病原菌（Phythiummyriotylum.）、青枯勞爾氏菌(Ralstonia solanacearum)等14種病原菌為指示菌，對5株菌通過平板對峙法測定抑菌譜，其中GJ

2、3和NS178均對10種以上的指示菌有拮抗作用，R2/R1在1.0和3.0之間，抑菌譜較廣、拮抗能力較強;GJ130和NS87對青枯勞爾氏菌（Ralstonia solanacerum Yabuuchi）和茄子黃萎病原菌（Verticillium dahliae）有較好的拮抗效果。而高產(chǎn)吲哚乙酸菌株NS111并沒有拮抗作用。
　　經(jīng)過形態(tài)觀察，生理生化特征分析以及16S rDNA序列分析，將GJ3鑒定為解淀粉芽孢桿菌（Bacill

3、us amyloliquefaciens）;GJ130為納什維爾鏈霉菌（Streptomycesnashvillensis）;NS87為非脫羧勒克氏菌（Leclercia adecarboxylate）;NS111為路德維希腸桿菌(Enterobacter ludwigii); NS178為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。16S rDNA序列在GenBank中注冊號分別為:KC312154、KF958192、KC31

4、2155、KC312156和KC312157。
　　為了研究菌劑對生姜的促生作用，在山東省萊蕪市辛莊鎮(zhèn)趙家泉村布置大田試驗，。試驗設(shè)置4組處理:G J3、GJ130、NS178、混菌（體積比1∶1∶1）和清水對照組，每個處理3個重復(fù)，隨機排列。菌劑施用時間為:播種時浸種（4月19日）和幼苗期灌根(8月3日)。測定收獲期莖圍、株高、分枝數(shù)、地上鮮重和姜重。結(jié)果顯示，J3能顯著提高分枝數(shù)以及產(chǎn)量，長勢優(yōu)于對照組;NS178制備的菌劑使

5、姜單重提高108％，效果極其顯著。
　　于收獲期采集土壤樣品。采用T-RFLP并結(jié)合PCA、CCA統(tǒng)計學(xué)方法探究菌劑對土壤微生物群落結(jié)構(gòu)多樣性的影響。對T-RFLP圖譜分析發(fā)現(xiàn)，生姜根際土壤中細菌群落結(jié)構(gòu)多樣性與對照組相比呈現(xiàn)顯著差異。將T-RFs數(shù)據(jù)輸入Phylogenetic Assignment Tool數(shù)據(jù)庫進行比對，對圖譜中的一些優(yōu)勢峰可能代表的物種進行了推測。結(jié)果表明，圖譜中優(yōu)勢峰可能代表的種屬分別為:產(chǎn)金菌屬（Chr

6、ysiogenes arsenatis）、好鹽紅螺菌屬（Rhodospirillum sodomense）、浮霉狀菌屬（Streptomyces rimosus）、秀麗嗜鹽細菌（Halobacteroides elegans）。使用Bio-Dap軟件對6個樣品進行多樣性指數(shù)的統(tǒng)計，可以看出對照組微生物群落結(jié)構(gòu)簡單，而使用菌劑的不同處理顯著豐富。各樣品間群落結(jié)構(gòu)相似度呈現(xiàn)明顯差異，說明不使用菌劑的微生物群落結(jié)構(gòu)趨于簡單，多樣性水平降低，導(dǎo)

7、致抗病能力下降。
　　為了獲得高濃度菌劑。本課題還以NS178為出發(fā)菌株，以豆芽汁為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，通過單因素試驗優(yōu)化了提高菌數(shù)和芽孢率的條件，獲取3個相關(guān)因子為葡萄糖、(NH4)2SO4和K2HPO4。采用Box-Behnken Design法對發(fā)酵培養(yǎng)基進行優(yōu)化，通過響應(yīng)面法分析最佳配方為葡萄糖2.28％、(NH4)2SO40.32％、K2HPO40.23％。并且對培養(yǎng)條件溫度、pH、轉(zhuǎn)速、裝液量進行優(yōu)化，分別為33℃、pH7.5