小菜蛾對(duì)氟蟲雙酰胺抗性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及Bi-PASA分子檢測.pdf

1、小菜蛾(Plutella xylostella L.)是世界性十字花科蔬菜的重要害蟲，也是抗藥性產(chǎn)生和發(fā)展嚴(yán)重的害蟲之一。由于其世代重疊嚴(yán)重，繁殖力強(qiáng)，加上一些地區(qū)田間不合理的用藥，導(dǎo)致田間小菜蛾抗藥性發(fā)展迅速且抗性背景復(fù)雜，這為該蟲的化學(xué)防治造成了較大困難。氟蟲雙酰胺作為新型魚尼丁受體激活類殺蟲劑，對(duì)鱗翅目害蟲高效，對(duì)哺乳動(dòng)物低毒、安全，作用于昆蟲后可使調(diào)控鈣離子釋放的魚尼丁受體通道持續(xù)開放，導(dǎo)致細(xì)胞中鈣離子濃度上升，持續(xù)的鈣離子釋放

2、會(huì)引起蟲體不斷的收縮、嘔吐、脫糞，進(jìn)而停止進(jìn)食，最終導(dǎo)致蟲體死亡。隨著氟蟲雙酰胺的應(yīng)用，害蟲對(duì)該藥劑的抗藥性問題也日益受到關(guān)注。為了了解小菜蛾對(duì)氟蟲雙酰胺的抗性發(fā)展情況，本文通過室內(nèi)抗性汰選及其生物適合度的研究，分析了小菜蛾對(duì)氟蟲雙酰胺的抗性風(fēng)險(xiǎn);同時(shí)以相對(duì)敏感品系、氟蟲雙酰胺抗性品系和田間抗性種群小菜蛾為材料，研究了抗性產(chǎn)生的可能分子機(jī)制及基因突變頻率，旨在為該藥劑的科學(xué)使用提供指導(dǎo)。研究結(jié)果如下:
　　1.采用點(diǎn)滴法，測定了小

3、菜蛾3齡幼蟲對(duì)氟蟲雙酰胺三個(gè)品系腫群的毒力，結(jié)果表明，氟蟲雙酰胺對(duì)相對(duì)敏感品系(S)小菜蛾的72 h LD50為0.921μg/g，對(duì)小菜蛾的廣東白云機(jī)場種群(BY)和增城種群(ZC)的72 h LD50分別為22.237μg/g和1638.680μg/g。
　　2.使用氟蟲雙酰胺并以殺死小菜蛾群體的40％～80％的劑量對(duì)相對(duì)敏感品系汰選17代后，氟蟲雙酰胺抗性品系(R)小菜蛾對(duì)氟蟲雙酰胺的抗性指數(shù)為40.72倍。自F0到F8抗性

4、發(fā)展緩慢，F(xiàn)9之后抗性發(fā)展逐漸加快，至F17已發(fā)展成中等水平的抗性。
　　3.通過交互抗性試驗(yàn)結(jié)果表明，高效氯氟氰菊酯、氯蟲苯甲酰胺和甲氨基阿維菌素對(duì)氟蟲雙酰胺抗性品系的毒力分別是相對(duì)敏感品系的2.75倍、4.84倍和1.90倍。氟蟲雙酰胺抗性品系對(duì)氯蟲苯甲酰胺和高效氯氟氰菊酯存在一定的交互抗性，而對(duì)甲氨基阿維菌素?zé)o明顯交互抗性。通過構(gòu)建種群生命表，比較了小菜蛾氟蟲雙酰胺抗性品系和相對(duì)敏感品系的一系列生長發(fā)育和繁殖特征。結(jié)果表明，

5、氟蟲雙酰胺抗性品系的適合度有所降低，為0.63，氟蟲雙酰胺抗性品系在繁殖能力上存在一定的生存劣勢。
　　4.應(yīng)用閾性狀分析法，研究了小菜蛾對(duì)氟蟲雙酰胺的抗性現(xiàn)實(shí)遺傳力，并對(duì)不同致死率下的抗性發(fā)展速率進(jìn)行了預(yù)測。結(jié)果表明，17代汰選期間抗性現(xiàn)實(shí)遺傳力為0.135。假設(shè)氟蟲雙酰胺對(duì)小菜蛾的致死率為50％、60％、70％、80％、90％和99％，對(duì)其抗性提高10倍所需代數(shù)分別進(jìn)行了預(yù)測（假設(shè)抗性汰選前后毒力回歸線的斜率為2.0，即δp=

6、0.5):在現(xiàn)實(shí)遺傳力h2=0.135時(shí)，群體中50％～90％的個(gè)體致死時(shí)，要獲得10倍的抗性約需8～19代;在現(xiàn)實(shí)遺傳力h2=0.093時(shí)，要獲得10倍的抗性約需12～27代。
　　5.根據(jù)已報(bào)道的小菜蛾RyR突變位點(diǎn)，設(shè)計(jì)了Bi-PASA檢測引物，分別檢測相對(duì)敏感品系、室內(nèi)氟蟲雙酰胺抗性品系和田間抗性種群(BY和ZC)的基因突變頻率。結(jié)果表明:田間ZC種群小菜蛾有80.77％突變純合子和19.23％的雜合子，沒有檢測到野生型;

7、田間BY種群小菜蛾有19.23％突變純合子、73.08％的雜合子和7.69％的野生型;相對(duì)敏感品系小菜蛾有16.67％的雜合子和83.33％的野生型，沒有檢測到突變純合子;室內(nèi)氟蟲雙酰胺抗性品系F17有19.23％突變純合子、65.38％的雜合子和15.38％的野生型。
　　6.采用熒光定量PCR測定了不同品系小菜蛾魚尼丁受體基因mRNA的表達(dá)量，結(jié)果表明，以相對(duì)敏感品系的表達(dá)量為1.0，氟蟲雙酰胺抗性品系的表達(dá)量是相對(duì)敏感品系小