小菜蛾對氟蟲雙酰胺抗性風險評估及Bi-PASA分子檢測.pdf

1、小菜蛾(Plutella xylostella L.)是世界性十字花科蔬菜的重要害蟲，也是抗藥性產(chǎn)生和發(fā)展嚴重的害蟲之一。由于其世代重疊嚴重，繁殖力強，加上一些地區(qū)田間不合理的用藥，導致田間小菜蛾抗藥性發(fā)展迅速且抗性背景復雜，這為該蟲的化學防治造成了較大困難。氟蟲雙酰胺作為新型魚尼丁受體激活類殺蟲劑，對鱗翅目害蟲高效，對哺乳動物低毒、安全，作用于昆蟲后可使調(diào)控鈣離子釋放的魚尼丁受體通道持續(xù)開放，導致細胞中鈣離子濃度上升，持續(xù)的鈣離子釋放

2、會引起蟲體不斷的收縮、嘔吐、脫糞，進而停止進食，最終導致蟲體死亡。隨著氟蟲雙酰胺的應用，害蟲對該藥劑的抗藥性問題也日益受到關注。為了了解小菜蛾對氟蟲雙酰胺的抗性發(fā)展情況，本文通過室內(nèi)抗性汰選及其生物適合度的研究，分析了小菜蛾對氟蟲雙酰胺的抗性風險;同時以相對敏感品系、氟蟲雙酰胺抗性品系和田間抗性種群小菜蛾為材料，研究了抗性產(chǎn)生的可能分子機制及基因突變頻率，旨在為該藥劑的科學使用提供指導。研究結(jié)果如下:
　　1.采用點滴法，測定了小

3、菜蛾3齡幼蟲對氟蟲雙酰胺三個品系腫群的毒力，結(jié)果表明，氟蟲雙酰胺對相對敏感品系(S)小菜蛾的72 h LD50為0.921μg/g，對小菜蛾的廣東白云機場種群(BY)和增城種群(ZC)的72 h LD50分別為22.237μg/g和1638.680μg/g。
　　2.使用氟蟲雙酰胺并以殺死小菜蛾群體的40％～80％的劑量對相對敏感品系汰選17代后，氟蟲雙酰胺抗性品系(R)小菜蛾對氟蟲雙酰胺的抗性指數(shù)為40.72倍。自F0到F8抗性

4、發(fā)展緩慢，F(xiàn)9之后抗性發(fā)展逐漸加快，至F17已發(fā)展成中等水平的抗性。
　　3.通過交互抗性試驗結(jié)果表明，高效氯氟氰菊酯、氯蟲苯甲酰胺和甲氨基阿維菌素對氟蟲雙酰胺抗性品系的毒力分別是相對敏感品系的2.75倍、4.84倍和1.90倍。氟蟲雙酰胺抗性品系對氯蟲苯甲酰胺和高效氯氟氰菊酯存在一定的交互抗性，而對甲氨基阿維菌素無明顯交互抗性。通過構建種群生命表，比較了小菜蛾氟蟲雙酰胺抗性品系和相對敏感品系的一系列生長發(fā)育和繁殖特征。結(jié)果表明，

5、氟蟲雙酰胺抗性品系的適合度有所降低，為0.63，氟蟲雙酰胺抗性品系在繁殖能力上存在一定的生存劣勢。
　　4.應用閾性狀分析法，研究了小菜蛾對氟蟲雙酰胺的抗性現(xiàn)實遺傳力，并對不同致死率下的抗性發(fā)展速率進行了預測。結(jié)果表明，17代汰選期間抗性現(xiàn)實遺傳力為0.135。假設氟蟲雙酰胺對小菜蛾的致死率為50％、60％、70％、80％、90％和99％，對其抗性提高10倍所需代數(shù)分別進行了預測（假設抗性汰選前后毒力回歸線的斜率為2.0，即δp=

6、0.5):在現(xiàn)實遺傳力h2=0.135時，群體中50％～90％的個體致死時，要獲得10倍的抗性約需8～19代;在現(xiàn)實遺傳力h2=0.093時，要獲得10倍的抗性約需12～27代。
　　5.根據(jù)已報道的小菜蛾RyR突變位點，設計了Bi-PASA檢測引物，分別檢測相對敏感品系、室內(nèi)氟蟲雙酰胺抗性品系和田間抗性種群(BY和ZC)的基因突變頻率。結(jié)果表明:田間ZC種群小菜蛾有80.77％突變純合子和19.23％的雜合子，沒有檢測到野生型;

7、田間BY種群小菜蛾有19.23％突變純合子、73.08％的雜合子和7.69％的野生型;相對敏感品系小菜蛾有16.67％的雜合子和83.33％的野生型，沒有檢測到突變純合子;室內(nèi)氟蟲雙酰胺抗性品系F17有19.23％突變純合子、65.38％的雜合子和15.38％的野生型。
　　6.采用熒光定量PCR測定了不同品系小菜蛾魚尼丁受體基因mRNA的表達量，結(jié)果表明，以相對敏感品系的表達量為1.0，氟蟲雙酰胺抗性品系的表達量是相對敏感品系小