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1、為明確小菜蛾(Plutella xylostella)對(duì)氯蟲苯甲酰胺的防御、代謝過程及氯蟲苯甲酰胺應(yīng)用中存在的抗性風(fēng)險(xiǎn),本文以小菜蛾為試蟲,測(cè)定了氯蟲苯甲酰胺脅迫對(duì)小菜蛾保護(hù)酶系(過氧化物酶POD、過氧化氫酶CAT)、代謝酶系(羧酸酯酶CarE、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶GST、細(xì)胞色素P450 酶系)的影響;采用浸葉法進(jìn)行了小菜蛾對(duì)氯蟲苯甲酰胺的抗性篩選,明確了抗性發(fā)展規(guī)律,獲得了對(duì)氯蟲苯甲酰胺達(dá)中等水平抗性的小菜蛾品系;測(cè)定了增效醚(PB
2、O)、順丁烯二酸二乙酯(DEM)和磷酸三苯酯(TPP)三種酶抑制劑對(duì)氯蟲苯甲酰胺的增效作用;比較了抗氯蟲苯甲酰胺小菜蛾品系與相對(duì)敏感品系幼蟲解毒酶系比活力、生物適合度的差異;測(cè)定了氯蟲苯甲酰胺與其他藥劑間的交互抗性;分析了小菜蛾對(duì)氯蟲苯甲酰胺的抗性風(fēng)險(xiǎn)。主要結(jié)果如下:
生化分析法測(cè)定氯蟲苯甲酰胺LC25 與LC50 處理小蛾幼蟲6 h~ 72 h 間對(duì)保護(hù)酶系、解毒酶系的影響。結(jié)果表明,兩濃度下氯蟲苯甲酰胺處理對(duì)小菜蛾幼蟲
3、體內(nèi)保護(hù)酶CAT、POD具有明顯的抑制作用。氯蟲苯甲酰胺處理6 h~ 72 h 間,對(duì)小菜蛾幼蟲體內(nèi)解毒酶的誘導(dǎo)具有順序性。處理后6 h,除了LC25 誘導(dǎo)的CarE活性比對(duì)照升高,各解毒酶系都有不同程度的抑制現(xiàn)象;處理后12 h,小菜蛾體內(nèi)CarE 最先被誘導(dǎo),且高濃度可誘導(dǎo)高活性,LC25 與LC50 處理后活性分別為對(duì)照的1.33倍和1.50倍;處理24 h后,小菜蛾體內(nèi)細(xì)胞色素P450的O-脫甲基活性(ODM)被誘導(dǎo),且LC25
4、 較LC50 可誘導(dǎo)高活性的ODM活性分別為對(duì)照的2.13倍與1.57倍;處理后48 h,可顯著誘導(dǎo)GST活性,處理濃度越高,被誘導(dǎo)活性越大,LC25 與LC50 處理后活性分別為對(duì)照的1.30倍和1.82倍。
用氯蟲苯甲酰胺對(duì)小菜蛾3 齡幼蟲篩選22 代,氯蟲苯甲酰胺對(duì)3 齡小菜蛾幼蟲的LC50 為1.74 μg/mL,抗性倍數(shù)達(dá)25.1倍;從F0到F10 抗性發(fā)展較為緩慢,F(xiàn)10之后抗性速度加快,到F22 發(fā)展了中等水
5、平的抗性。交互抗性試驗(yàn)結(jié)果表明,高效氯氰菊酯、氟鈴脲、蟲酰肼、蟲螨腈、毒死蜱、多殺菌素、甲維鹽對(duì)抗性品系的毒力分別是敏感品系的4.27倍、3.35倍、3.07倍、2.73倍、2.25倍、1.36倍和1.12倍??孤认x苯甲酰胺小菜蛾品系對(duì)擬除蟲菊酯類、幾丁質(zhì)抑制劑類、蛻皮激素類似物、芳基吡咯類、有機(jī)磷類都有不同程度的交互抗性,而對(duì)于大環(huán)內(nèi)脂及其衍生物類殺蟲劑無明顯交互抗性現(xiàn)象。
PBO、DEM和TPP 三種酶抑制劑對(duì)抗氯蟲苯
6、甲酰胺小菜蛾品系均有顯著的增效作用,增效分別達(dá)15.5、3.90和2.48倍。抗性與敏感品系小菜蛾幼蟲離體解毒酶活研究表明,抗氯蟲苯甲酰胺小菜蛾幼蟲體內(nèi)的谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶GST、羧酸酯酶CarE 比活力分別為217.6 μmol/min/mg Pr.,448.2 μmol/min/mg Pr.,高于敏感品系但無顯著差異;細(xì)胞色素P450 O-脫甲基活性為0.167 μmol/min/mg Pr.,顯著高于敏感品系,是敏感種的2.13
7、倍。
采用組建生命表法比較小菜蛾抗氯蟲苯甲酰胺品系的相對(duì)生物適合度表明,抗性品系相對(duì)敏感品系的適合度為0.81。與敏感品系相比,抗性品系卵期縮短近0.5 d,蛹期也有所縮短,但幼蟲歷期延長(zhǎng)5 d,使總歷期延長(zhǎng);雄成蟲壽命縮短58.2 %,但產(chǎn)卵峰期沒有影響,且單雌產(chǎn)卵量顯著增加;抗性品系的羽化率、幼蟲存活率、化蛹率都顯著低于敏感品系;抗性品系的內(nèi)稟增長(zhǎng)率、毛增值率、凈增殖率均顯著降低。
采用閾性狀分析法,對(duì)小
8、菜蛾抗氯蟲苯甲酰胺品系的現(xiàn)實(shí)遺傳力進(jìn)行估算,整個(gè)22代篩選期間抗性遺傳力較低,為0.165。假設(shè)氯蟲苯甲酰胺對(duì)小菜蛾的殺死率為50 %、60 %、70 %、80 %、90 %和99 %,對(duì)抗性提高10倍所需的代數(shù)分別進(jìn)行預(yù)測(cè)(假設(shè)篩選前后毒力回歸線的斜率為2.0,即δp=0.5):在現(xiàn)實(shí)遺傳力h2=0.16 時(shí),群體中50 %~90 %個(gè)體致死時(shí),要獲得10倍的抗性約需15~ 7 代;在現(xiàn)實(shí)遺傳力h2=0.08 時(shí),要獲得10倍的抗性約
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