PMSG劑量對中國荷斯坦奶牛繁殖性能的影響以及抗PMSG抗體制備和應(yīng)用研究.pdf

1、孕馬血清促性腺激素(PMSG)是雌性馬屬動物胎盤的尿囊絨毛膜子宮內(nèi)膜杯細(xì)胞分泌的一種促性腺糖蛋白激素，也是胚胎的一種代謝產(chǎn)物，兼具促卵泡素和黃體生成激素的雙重活性，能夠促進(jìn)卵泡的發(fā)育和排卵。相對于其它激素類藥物，PMSG具有生產(chǎn)成本低，超數(shù)排卵效果好等優(yōu)勢，被廣泛的應(yīng)用于各種動物的試驗(yàn)研究和實(shí)際生產(chǎn)中。
　　 本試驗(yàn)首先探索了PMSG劑量對中國荷斯坦奶牛發(fā)情、發(fā)情間隔和受胎率等繁殖性能的影響，進(jìn)而探討了PMSG劑量對卵泡發(fā)育和雌

2、激素分泌的影響，另外，還對應(yīng)用PMSG后對奶牛后期繁殖性能的影響進(jìn)行了跟蹤研究，為PMSG的研究和應(yīng)用推廣提供理論依據(jù);根據(jù)以上研究提供的依據(jù)，同時對PMSG劑量對中國荷斯坦育成牛的繁殖性能的影響進(jìn)行了研究，并與研究中經(jīng)產(chǎn)牛的試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行對比分析，分析育成牛和經(jīng)產(chǎn)牛對不同劑量PMSG反應(yīng)敏感性的差異，為PMSG在育成牛上的應(yīng)用提供參考。由于PMSG存在半衰期過長等不可控性因素，在實(shí)際應(yīng)用中會產(chǎn)生一些負(fù)面影響，為了消除PMSG應(yīng)用后的不利

3、影響，本研究還進(jìn)行了抗PMSG的生產(chǎn)和應(yīng)用方面的探索。
　　 1.PMSG劑量對中國荷斯坦奶牛繁殖性能的影響
　　 (1)PMSG劑量對中國荷斯坦經(jīng)產(chǎn)牛繁殖性能的影響
　　 選取無任何繁殖障礙和生理疾病的中國荷斯坦經(jīng)產(chǎn)牛100頭，隨機(jī)分為5組，每組20頭，并將每頭牛進(jìn)行稱重。5組奶牛分別肌肉注射2、2.5、3、3.5和4IU/kgBW（BW:體重），并在48h后肌肉注射PGF2α。每天對試驗(yàn)?zāi)膛５陌l(fā)情進(jìn)行監(jiān)測，在

4、發(fā)情后8～12h進(jìn)行配種，配種后30天利用B超對奶牛進(jìn)行早孕檢測。結(jié)果顯示，在PMSG和PGF2α的共同作用下，促進(jìn)了奶牛的發(fā)情，縮短了發(fā)情間隔，各試驗(yàn)組的發(fā)情率和發(fā)情間隔差異不顯著。奶牛的受胎率隨著PMSG劑量的升高而降低，其中最高劑量組(4IU/kgBW)的受胎率顯著高于兩個低劑量試驗(yàn)組(2和2.5IU/kgBW)，但是各個試驗(yàn)組的產(chǎn)犢率相似。PMSG劑量顯著影響試驗(yàn)?zāi)膛５亩嗵ヂ?，其中最高劑量試?yàn)組(4IU/kgBW)的多胎率達(dá)到5

5、0％。通過對試驗(yàn)中發(fā)情未孕的奶牛進(jìn)行跟蹤觀察，發(fā)現(xiàn)應(yīng)用高劑量PMSG試驗(yàn)組（3、3.5和4IU/kgBW）的第一次自然返情間隔顯著長于最低劑量組(2IU/kgBW)，但PMSG劑量對返情后的受胎率無顯著影響。
　　 (2)PMSG劑量對中國荷斯坦經(jīng)產(chǎn)牛卵泡數(shù)目和雌激素分泌的影響
　　 在研究PMSG劑量對中國荷斯坦經(jīng)產(chǎn)牛繁殖性能影響的同時，本試驗(yàn)還對PMSG劑量對卵泡數(shù)目和雌激素分泌的影響進(jìn)行了觀察和測定。在上述試驗(yàn)的過

6、程中分別在注射PMSG、PGF2α、發(fā)情和配種四個時間點(diǎn)采血，收集血清，并通過放射性免疫(RIA)方法測定雌激素水平，并在發(fā)情時利用B超對奶牛卵巢上卵泡的發(fā)育情況進(jìn)行觀察，分析統(tǒng)計(jì)大卵泡(＞10mm)和中等卵泡(5～10mm)的數(shù)量。結(jié)果表明，PMSG劑量對大卵泡的數(shù)量無顯著影響，但是中等卵泡的數(shù)量隨著PMSG劑量的升高顯著增加。雌激素濃度的變化也受到了PMSG劑量的影響，尤其在發(fā)情到配種的這段時間，隨著PMSG劑量的升高，雌激素下降的

7、幅度明顯減小。
　　 (3)PMSG劑量對中國荷斯坦育成牛繁殖性能的影響
　　 上述試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)高劑量PMSG試驗(yàn)組(3.5和4IU/kgBW)的多胎率過高，為了避免育成牛產(chǎn)多胎而導(dǎo)致流產(chǎn)或者早產(chǎn)，本試驗(yàn)選擇了3個較低PMSG劑量(2、2.5和3IU/kgBW)對育成牛進(jìn)行處理。為了與以上試驗(yàn)中經(jīng)產(chǎn)牛的研究數(shù)據(jù)進(jìn)行對比，本試驗(yàn)選擇在與以上試驗(yàn)相同的季節(jié)，天氣情況、飼養(yǎng)方法和藥物處理等條件下進(jìn)行。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，育成牛的發(fā)情率

8、和發(fā)情間隔都未受到PMSG劑量的顯著影響，并且在相同PMSG劑量下，育成牛和經(jīng)產(chǎn)牛的發(fā)情率和發(fā)情間隔無顯著差異。育成牛的受胎率隨著劑量的增加而降低，而且在相同PMSG劑量下，育成牛的受胎率低于經(jīng)產(chǎn)牛。PMSG劑量對育成牛的產(chǎn)犢率無顯著影響，并且各試驗(yàn)組的產(chǎn)犢率與經(jīng)產(chǎn)牛相比較無差異。隨著PMSG劑量的升高，育成牛的多胎率增加，在相同劑量的情況下青年牛的多胎率高于經(jīng)產(chǎn)牛，尤其是在低劑量組(2和2.5IU/kgBW)中，本研究中經(jīng)產(chǎn)牛沒有出現(xiàn)

9、多胎情況，而育成牛的多胎率為25％。與經(jīng)產(chǎn)牛不同的是，PMSG劑量對育成牛第一次自然返情間隔的影響較小，并且在高劑量組（2.5和3IU/kgBW）中，育成牛的返情間隔顯著短于經(jīng)產(chǎn)牛。
　　 2.抗PMSG抗體的制備和應(yīng)用研究
　　 (1)抗PMSG抗體的制備
　　 通過碳二亞胺法將PMSG與牛血清白蛋白(BSA)偶聯(lián)，增加PMSG的免疫原性。經(jīng)紫外分光光度計(jì)對偶聯(lián)后的產(chǎn)物進(jìn)行鑒定分析后發(fā)現(xiàn)，成功獲得PMSG-BS

10、A人工抗原，并且經(jīng)過動物試驗(yàn)測定證明，合成的人工抗原具有PMSG的生物學(xué)活性。為了制備大量抗PMSG抗體，將合成的人工抗原免疫公牛。經(jīng)過多次免疫后成功獲得高效價抗PMSG抗體，并利用飽和硫酸銨法對獲得的抗體進(jìn)行了提取和純化。
　　 (2)抗PMSG抗體的應(yīng)用研究
　　 選取中國荷斯坦經(jīng)產(chǎn)牛225頭，隨機(jī)分為3個試驗(yàn)組，每組75頭，再將每個試驗(yàn)組的75頭試驗(yàn)?zāi)膛ｋS機(jī)分為5個小組，每小組15頭。3個試驗(yàn)組中的5個小組分別肌肉

11、注射2、2.5、3、3.5和4IU/kgBWPMSG，48h后再肌注PGF2。。每天對試驗(yàn)?zāi)膛５陌l(fā)情進(jìn)行監(jiān)測，在發(fā)情后8～12h進(jìn)行配種，并在配種后30天利用B超對奶牛進(jìn)行早孕檢測，而且其中兩個試驗(yàn)組分別在發(fā)情時和配種時肌肉注射相應(yīng)中和劑量的抗PMSG抗體作為試驗(yàn)組，另外一組不做抗體注射處理作為對照組。試驗(yàn)結(jié)果表明，抗PMSG抗體的應(yīng)用提高了高劑量PMSG試驗(yàn)組奶牛的受胎率，并改善了PMSG對奶牛后期繁殖性能的不利影響，但是在發(fā)情時和配