江蘇地區(qū)鯽出血病病原的分離、鑒定及檢測(cè)方法研究.pdf

1、鯽（Crassius auratus）與金魚(yú)(Carassius auratus L.)的親緣關(guān)系較近，作為我國(guó)淡水養(yǎng)殖的名優(yōu)品種，養(yǎng)殖規(guī)模和養(yǎng)殖潛力越來(lái)越大，然而罕有關(guān)鯽病毒病方面的報(bào)道。鯉科皰疹病毒2型(CyHV-2)，又稱為皰疹造血器官壞死病毒（HVHNV）或金魚(yú)造血器官壞死病毒(GFHNV)，是一種可感染金魚(yú)的致病原。1992年秋季和1993年春季在日本西部養(yǎng)殖的金魚(yú)暴發(fā)皰疹病毒性造血器官壞死病，造成的死亡率幾乎達(dá)到了100％，

2、這是有關(guān)該病的首次報(bào)道。在此之后美國(guó)、臺(tái)灣、澳大利亞、英國(guó)和新西蘭相繼有該疾病暴發(fā)的報(bào)道。這些報(bào)道表明鯉科皰疹病毒2型在金魚(yú)中廣泛傳播。
　　 2011-2012，國(guó)內(nèi)某些異育銀鯽（Carassius aurutus gibelio）養(yǎng)殖的主要產(chǎn)區(qū)出現(xiàn)暴發(fā)性疾病，發(fā)病魚(yú)體表充血腹部腫脹，眼眶基部充血，鰓絲嚴(yán)重出血并發(fā)白，肌肉出血，脾腎有程度不一的出血，肝脾腫大，鰾出現(xiàn)點(diǎn)狀出血。為查明病因?qū)Πl(fā)病魚(yú)進(jìn)行病原鑒定分析，顯微鏡鏡檢未發(fā)現(xiàn)

3、寄生蟲(chóng)感染;用從病魚(yú)病灶組織分離得到的細(xì)菌進(jìn)行人工回染試驗(yàn)，20天內(nèi)試驗(yàn)魚(yú)無(wú)死亡;電鏡下觀察到發(fā)病魚(yú)病灶組織細(xì)胞內(nèi)有大量不同生長(zhǎng)期的球形病毒顆粒，病毒粒子有囊膜，直徑在90～170nm;提取病魚(yú)組織核酸，鯉春病毒血癥病毒(SVCV)、錦鯉皰疹病毒(KHV)、金魚(yú)造血器官壞死病毒(GFHNV)的特異性引物進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)，結(jié)果只有GFHNV引物擴(kuò)增出特異性的基因片段，測(cè)序結(jié)果表明其與GFHNV的參考序列有99％的相似性。用出現(xiàn)

4、典型癥狀發(fā)病魚(yú)的組織上清人工感染健康異育銀鯽，試驗(yàn)魚(yú)在3d后陸續(xù)發(fā)病死亡，患病癥狀同自然發(fā)病癥狀，并從感染魚(yú)組織中檢測(cè)到GFHNV;將處理的病樣上清液接種在錦鯉鰭條細(xì)胞（KF）中7天后出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變（cytopathic effects，CPE），同時(shí)在經(jīng)過(guò)兩代盲傳后的細(xì)胞經(jīng)過(guò)PCR檢測(cè)也獲得了GFHNV陽(yáng)性目的片段，并在電鏡下觀察到病毒粒子。根據(jù)上述結(jié)果，判定本次異育銀鯽暴發(fā)性疾病病因是GFHNV感染。
　　 為進(jìn)一步研究

5、病毒特性，作者以典型癥狀發(fā)病魚(yú)組織勻漿液腹腔注射或浸泡對(duì)健康異育銀鯽進(jìn)行該病毒生物學(xué)特性研究，得出GFHNV的宿主范圍包括金魚(yú)和鯽魚(yú)的普通變種，最適感染溫度20-25℃;GFHNV對(duì)異育銀鯽不同魚(yú)齡均有致病力，但幼魚(yú)比成魚(yú)更易感，且死亡高峰期提前。
　　 運(yùn)用石蠟包埋及制備組織病理切片對(duì)患病鯽的鰓、腦、脾、腎、肝胰臟、腸等多個(gè)組織進(jìn)行病理學(xué)研究，同時(shí)對(duì)其治病機(jī)理進(jìn)行初步分析。該病癥主要表現(xiàn)為靶器官細(xì)胞出現(xiàn)腫脹、變性、增生的壞死現(xiàn)