稻瘟病菌F-box基因缺失突變體構(gòu)建及生物學(xué)表型分析.pdf

1、稻瘟病菌(Magnaportheoryzae)是水稻生產(chǎn)上最具破壞性的致病真菌之一,嚴(yán)重威脅著水稻的安全生產(chǎn)。近年來,隨著稻瘟病菌全基因組數(shù)據(jù)的公布,加速了人們對其致病相關(guān)基因的挖掘進(jìn)程;同時(shí)也使得它與水稻的互作研究成為探索寄主與植物病原真菌互作機(jī)制的理想模式之一。從分子水平解析稻瘟病菌的生長發(fā)育過程及致病分子機(jī)制,對有效控制病害發(fā)生及促進(jìn)水稻安全生產(chǎn)和提高品質(zhì)具有重要的科學(xué)意義。
　　本文采用啤酒酵母菌(Saccharomyce

2、scerevisiae)F-box蛋白的氨基酸序列,對稻瘟病菌全基因組數(shù)據(jù)庫進(jìn)行Blast_p分析,獲得一個(gè)與之同源的蛋白編碼基因MGG_06351.6,命名為Mofbox。序列分析發(fā)現(xiàn),該基因編碼的蛋白氨基端有一個(gè)典型的F-box結(jié)構(gòu)域,羧基端存在一個(gè)核定位信號(KTKR)。采用同源重組方法,構(gòu)建基因敲除載體并轉(zhuǎn)化野生型菌株Guy11,獲得2個(gè)基因缺失突變體。研究表明,缺失Mofbox后,可使稻瘟病菌生長速率較Guy11菌株下降10.

3、0％左右,敲除突變體對NaCl、SDS和H2O2的耐受性分別減弱5.0%、6.0%和17.0%,但對CFW和CR的耐受性分別增加2.5%和4.1%;Mofbox突變體產(chǎn)分生孢子的能力較Guy11菌株分別顯著下降55.0%和52.0%;Mofbox突變體對四棱大麥和水稻(敏感品種CO-39)的致病性顯著降低。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),突變體分生孢子在疏水界面上形成附著胞的能力較Guy11菌株顯著降低,且膨壓下降;洋蔥表皮侵染試驗(yàn)亦表明,野生型菌株和