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文檔簡介
1、氟喹諾酮類(FQs)和四環(huán)素類(TCs)抗生素均是化學合成的抗生素,因具有抗菌譜廣、殺菌力強的特點而被廣泛應用于畜牧養(yǎng)殖業(yè)中動物疾病的預防及治療。但是不合理的使用或濫用造成動物源性食品和環(huán)境中大量抗生素抗生素的殘留。在使用過程中大部分抗生素不能完全被機體吸收,約有60%-90%的抗生素以其原形或者代謝產(chǎn)物形式經(jīng)畜禽的糞便、尿液進入環(huán)境,對地表水、農(nóng)田土壤甚至地下水等造成嚴重污染;畜禽糞便中的這兩類抗生素在土壤中不能完全降解,而且可以在土
2、壤中不斷蓄積。經(jīng)被動擴散和主動運輸被植物性食品的根部吸收,在植物性食品的根、莖、葉、果實、種子富集。富集抗生素殘留的植物進入食物鏈,影響食品安全,最終將不同程度地被人類吸收,對人類的健康產(chǎn)生危害。因此,對畜禽養(yǎng)殖場的糞便及環(huán)境中氟喹諾酮類(FQs)和四環(huán)素類(TCs)抗生素殘留檢測方法的研究是十分必要的。
本課題以畜禽養(yǎng)殖場的糞便為實驗材料,以氟喹諾酮類(FQs)和四環(huán)素類(TCs)抗生素:恩諾沙星、培氟沙星、達氟沙星、沙
3、拉沙星、四環(huán)素和金霉素六種抗生素作為研究對象,對畜禽養(yǎng)殖場糞便中六種抗生素的前處理方法和檢測技術(shù)進行研究。研究了畜禽糞便中的氟喹諾酮類與四環(huán)素類抗生素殘留同時提取的方法,分別建立了同時檢測4種喹諾酮類(FQs)和2種四環(huán)素類(TCs)抗生素的高效毛細管電泳和高效液相色譜檢測技術(shù),并調(diào)查了環(huán)巢湖地區(qū)養(yǎng)殖場畜禽糞便中六種抗生素殘留的現(xiàn)狀。
具體研究內(nèi)容如下:
1、畜禽糞便中4種喹諾酮類(FQs)和2種四環(huán)素類(T
4、Cs)抗生素同時提取方法的研究
實驗考察了不同提取劑對4種喹諾酮類(FQs)和2種四環(huán)素類(TCs)提取效果的影響。建立了EDTA-McIlvaine與50%Mg(NO3)2-2.5%NH3·H2O混合提取方法??疾炝藘煞N提取劑混合時的比例,結(jié)果表明,當EDTA-McIlvaine與50%Mg(NO3)2-2.5%NH3·H2O提取劑的體積比為3:1時,六種抗生素抗生素殘留的提取率為83.6%~92.1%。
5、在粗提的基礎(chǔ)上采用固相萃取(SPE)技術(shù)對樣品進行純化:實驗分別考察了淋洗劑與洗脫劑的種類、用量,確定了以蒸餾水為淋洗劑,0.01mol/L的草酸甲醇為洗脫劑的SPE法,該方法的回收率為85.2%~88.5%。
2、高效毛細管電泳技術(shù)(HPCE)同時檢測4種FQs與2種TCs抗生素方法的建立
采用高效毛細管電泳建立4種氟喹諾酮類(FQs)與2種四環(huán)素類(TCs)抗生素同時分離的方法,通過研究緩沖液離子濃度、p
6、H、有機添加劑以及分離電壓、溫度等電泳參數(shù),最終通過正交實驗確立了電泳的最佳條件:50mmol/L硼砂-200mmol/L硼酸緩沖溶液,pH8.41,分離電壓為18kV,紫外檢測波長270nm。結(jié)果表明,六種抗生素在12分鐘內(nèi)達到完全分離,且各組分濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系,其相關(guān)系數(shù)R2為0.9986~0.9993,遷移時間的相對標準偏差(RSD)為0.25%~0.40%,峰面積相對標準偏差(RSD)為7.3%~9.8%。
7、 3、高效液相色譜技術(shù)(HPLC)同時檢測4種FQs與2種TCs抗生素方法的建立
建立了高效液相色譜技術(shù)同時檢測4種FQs與2種TCs抗生素的方法,通過研究檢測波長、流動相的組成與配比、流速、色譜柱溫度等條件,確定了最優(yōu)色譜條件:檢測波長為270nm,柱溫箱溫度為35℃,流速為1ml/min,流動相為乙腈/0.1%乙酸(V/V),梯度洗脫:0.01min:19/81,5min:40/60,6min:85/15,7min
8、:85/15,8min:19/81,20min:19/81。結(jié)果表明,6種抗生素在20分鐘內(nèi)達到完全分離,且各組分濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系,其相關(guān)系數(shù)R2為0.9990~0.9999,遷移時間的相對標準偏差(RSD)為0.07%~0.39%,峰面積相對標準偏差(RSD)為1.98%~3.12%。
本研究確立了EDTA-McIlvaine與50%Mg(NO3)2-2.5%NH3·H2O混合同時提取六種抗生素抗生素殘留的方
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