畜禽糞便中喹諾酮類與四環(huán)素類抗生素殘留檢測(cè)技術(shù)的研究.pdf

1、氟喹諾酮類(FQs)和四環(huán)素類(TCs)抗生素均是化學(xué)合成的抗生素，因具有抗菌譜廣、殺菌力強(qiáng)的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于畜牧養(yǎng)殖業(yè)中動(dòng)物疾病的預(yù)防及治療。但是不合理的使用或?yàn)E用造成動(dòng)物源性食品和環(huán)境中大量抗生素抗生素的殘留。在使用過(guò)程中大部分抗生素不能完全被機(jī)體吸收，約有60％-90％的抗生素以其原形或者代謝產(chǎn)物形式經(jīng)畜禽的糞便、尿液進(jìn)入環(huán)境，對(duì)地表水、農(nóng)田土壤甚至地下水等造成嚴(yán)重污染；畜禽糞便中的這兩類抗生素在土壤中不能完全降解，而且可以在土

2、壤中不斷蓄積。經(jīng)被動(dòng)擴(kuò)散和主動(dòng)運(yùn)輸被植物性食品的根部吸收，在植物性食品的根、莖、葉、果實(shí)、種子富集。富集抗生素殘留的植物進(jìn)入食物鏈，影響食品安全，最終將不同程度地被人類吸收，對(duì)人類的健康產(chǎn)生危害。因此，對(duì)畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)的糞便及環(huán)境中氟喹諾酮類(FQs)和四環(huán)素類(TCs)抗生素殘留檢測(cè)方法的研究是十分必要的。
　　 本課題以畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)的糞便為實(shí)驗(yàn)材料，以氟喹諾酮類(FQs)和四環(huán)素類(TCs)抗生素：恩諾沙星、培氟沙星、達(dá)氟沙星、沙

3、拉沙星、四環(huán)素和金霉素六種抗生素作為研究對(duì)象，對(duì)畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)糞便中六種抗生素的前處理方法和檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行研究。研究了畜禽糞便中的氟喹諾酮類與四環(huán)素類抗生素殘留同時(shí)提取的方法，分別建立了同時(shí)檢測(cè)4種喹諾酮類(FQs)和2種四環(huán)素類(TCs)抗生素的高效毛細(xì)管電泳和高效液相色譜檢測(cè)技術(shù)，并調(diào)查了環(huán)巢湖地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)畜禽糞便中六種抗生素殘留的現(xiàn)狀。
　　 具體研究?jī)?nèi)容如下：
　　 1、畜禽糞便中4種喹諾酮類(FQs)和2種四環(huán)素類(T

4、Cs)抗生素同時(shí)提取方法的研究
　　 實(shí)驗(yàn)考察了不同提取劑對(duì)4種喹諾酮類(FQs)和2種四環(huán)素類(TCs)提取效果的影響。建立了EDTA-McIlvaine與50％Mg(NO3)2-2.5％NH3·H2O混合提取方法?？疾炝藘煞N提取劑混合時(shí)的比例，結(jié)果表明，當(dāng)EDTA-McIlvaine與50％Mg(NO3)2-2.5％NH3·H2O提取劑的體積比為3:1時(shí)，六種抗生素抗生素殘留的提取率為83.6％～92.1％。
　　

5、在粗提的基礎(chǔ)上采用固相萃取(SPE)技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)行純化：實(shí)驗(yàn)分別考察了淋洗劑與洗脫劑的種類、用量，確定了以蒸餾水為淋洗劑，0.01mol/L的草酸甲醇為洗脫劑的SPE法，該方法的回收率為85.2％～88.5％。
　　 2、高效毛細(xì)管電泳技術(shù)(HPCE)同時(shí)檢測(cè)4種FQs與2種TCs抗生素方法的建立
　　 采用高效毛細(xì)管電泳建立4種氟喹諾酮類(FQs)與2種四環(huán)素類(TCs)抗生素同時(shí)分離的方法，通過(guò)研究緩沖液離子濃度、p

6、H、有機(jī)添加劑以及分離電壓、溫度等電泳參數(shù)，最終通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確立了電泳的最佳條件：50mmol/L硼砂-200mmol/L硼酸緩沖溶液，pH8.41，分離電壓為18kV，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)270nm。結(jié)果表明，六種抗生素在12分鐘內(nèi)達(dá)到完全分離，且各組分濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)R2為0.9986～0.9993，遷移時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.25％～0.40％，峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為7.3％～9.8％。
　

7、　 3、高效液相色譜技術(shù)(HPLC)同時(shí)檢測(cè)4種FQs與2種TCs抗生素方法的建立
　　 建立了高效液相色譜技術(shù)同時(shí)檢測(cè)4種FQs與2種TCs抗生素的方法，通過(guò)研究檢測(cè)波長(zhǎng)、流動(dòng)相的組成與配比、流速、色譜柱溫度等條件，確定了最優(yōu)色譜條件：檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm，柱溫箱溫度為35℃，流速為1ml/min，流動(dòng)相為乙腈/0.1％乙酸(V/V)，梯度洗脫：0.01min：19/81，5min：40/60，6min：85/15，7min

8、：85/15，8min：19/81，20min：19/81。結(jié)果表明，6種抗生素在20分鐘內(nèi)達(dá)到完全分離，且各組分濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)R2為0.9990～0.9999，遷移時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.07％～0.39％，峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.98％～3.12％。
　　 本研究確立了EDTA-McIlvaine與50％Mg(NO3)2-2.5％NH3·H2O混合同時(shí)提取六種抗生素抗生素殘留的方