茯苓性不親和模式的初步研究.pdf

1、茯苓[Wolfiporia cocos(Schwein.)Ryvarden&Gilb.]是我國(guó)傳統(tǒng)的藥材之一，屬于多孔菌科(Polyporaceae)茯苓屬(Wolfiporia)，以其干燥的菌核入藥，在中藥炮制中配伍率極高。茯苓基礎(chǔ)研究嚴(yán)重滯后，茯苓性模式及生活史目前仍無(wú)定論，致使茯苓育種仍停留于從野生或馴化菌株中進(jìn)行選擇的水平，同質(zhì)化現(xiàn)象嚴(yán)重，生產(chǎn)上常因菌種退化造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。究其原因，一是茯苓子實(shí)體形成極具偶然性，易受菌株特性

2、和培養(yǎng)條件的影響：二是茯苓菌絲細(xì)胞多核且無(wú)鎖狀聯(lián)合，不同核相的菌絲在形態(tài)上基本相似，無(wú)法從形態(tài)上加以區(qū)分，也缺少有效的檢測(cè)技術(shù)手段。本人在實(shí)驗(yàn)室條件下對(duì)茯苓菌絲體進(jìn)行了子實(shí)體誘導(dǎo)試驗(yàn)，對(duì)形成的子實(shí)體進(jìn)行了超微結(jié)構(gòu)觀察，在此基礎(chǔ)上，以栽培菌株L的11株原生質(zhì)體再生菌株及多個(gè)單孢菌株為材料，通過(guò)系列配對(duì)和結(jié)實(shí)試驗(yàn)，對(duì)茯苓的性模式進(jìn)行了探討。
　　 在茯苓子實(shí)體誘導(dǎo)試驗(yàn)中，通過(guò)適宜溫濕度條件下的長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)、光照誘導(dǎo)及通過(guò)轉(zhuǎn)接處理的損失

3、誘導(dǎo)的方法誘導(dǎo)茯苓子實(shí)體的形成。結(jié)果表明，武漢地區(qū)在4、5月份的時(shí)間段室溫(溫度范圍20℃-30℃)培養(yǎng)茯苓子實(shí)體，子實(shí)體的形成隨機(jī)性較強(qiáng)，形成幾率較低；采用光照誘導(dǎo)法，黑暗培養(yǎng)一段時(shí)間后，再進(jìn)行光暗交替培養(yǎng)，可提高茯苓子實(shí)體形成率；損傷誘導(dǎo)法可控性較強(qiáng)，菌株L經(jīng)30 d以上的黑暗培養(yǎng)，再將其轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)基中進(jìn)行光暗交替培養(yǎng)，子實(shí)體形成的幾率較高。
　　 在茯苓子實(shí)體超微結(jié)構(gòu)觀察試驗(yàn)中，進(jìn)行了冷凍切片、掃描電子顯微鏡和透射電子顯

4、微鏡觀察。結(jié)果顯示，茯苓子實(shí)體外表面由擔(dān)子層覆蓋，內(nèi)部為致密的菌髓，菌髓細(xì)胞均含有1-2個(gè)大囊泡，存在二叉分支結(jié)構(gòu)。擔(dān)子由菌絲頂端細(xì)胞形成，頂端細(xì)胞無(wú)色透明，緊密排列，菌絲排列與擔(dān)子層近垂直。其擔(dān)子果為裸果型，子實(shí)層為兩側(cè)型，絕大多數(shù)擔(dān)子上著生4個(gè)擔(dān)孢子，有極少數(shù)擔(dān)子上著生3個(gè)擔(dān)孢子。擔(dān)孢子著生處有縊縮，擔(dān)孢子發(fā)育不同步。
　　 在配對(duì)試驗(yàn)及結(jié)實(shí)試驗(yàn)中，以茯苓菌株L、菌株L的11株原生質(zhì)體再生菌株及52個(gè)菌株L的單孢分離菌株為試

5、驗(yàn)材料，進(jìn)行了菌株L原生質(zhì)體再生菌株與菌株L單孢菌株之間的對(duì)峙培養(yǎng)試驗(yàn)、單孢菌株與其親本菌株L的對(duì)峙培養(yǎng)試驗(yàn)、單孢菌株間的配對(duì)試驗(yàn)、以及表現(xiàn)為可和諧生長(zhǎng)的單孢配對(duì)交接處菌絲體與菌株L及兩個(gè)親本單孢菌株的對(duì)峙培養(yǎng)試驗(yàn)。綜合分析以上單孢配對(duì)和體細(xì)胞不親和反應(yīng)類型，選取B18和B20這2個(gè)典型可配對(duì)成功的菌株作為測(cè)試菌株，對(duì)50個(gè)單孢菌株的交配型進(jìn)行了鑒定，結(jié)果表明，茯苓單孢菌株有2種不同交配型因子，經(jīng)X2驗(yàn)證，2種不同交配型因子單孢菌株數(shù)量