不結(jié)球白菜‘矮腳黃’自交不親和性的SSR分子標記.pdf

1、不結(jié)球白菜（Brassica campestris ssp.chinensis Makino）是十字花科（Cruciferae）蕓薹屬（Brassica）作物二倍體基本種之一，是我國南方重要的葉菜類蔬菜，在日常生活中占有重要的地位。不結(jié)球白菜屬于異花授粉作物，具有自交不親和特性。本研究利用不結(jié)球白菜自交不親和材料與自交親和材料配置雜交組合，獲得F2分離群體，并在此基礎上進行自交不親和性狀的遺傳分析以及SSR分子標記的篩選。研究結(jié)果如下:

2、
　　1.以不結(jié)球白菜‘002’和‘210’為親本，配制2個雜交組合F2(‘002’ב210’)和F2(‘210’ב002’)，研究了不結(jié)球白菜F2群體自交不親和性狀的遺傳特性。通過親和指數(shù)的測定，對其親和性進行統(tǒng)計和x2測驗，結(jié)果表明兩個雜交組合在F2群體中自交不親和性狀發(fā)生分離，出現(xiàn)了自交不親和與自交親和兩種類型的植株。F2(‘002’ב210’)分離群體調(diào)查了78株，其中自交親和植株有57株，自交不親和植株有21株。F

3、2(‘210’ב002’)分離群體有158株，其中自交親和植株有113株，自交不親和植株有45株。自交親和植株與自交不親和植株分離比符合3∶1。自交親和性對自交不親和性是由一對等位基因控制的顯性遺傳性狀。
　　2.為了找到與不結(jié)球白菜自交不親和基因連鎖的分子標記，選用352對SSR引物對不結(jié)球白菜自交不親和和自交親和的親本進行PCR擴增和電泳檢測，結(jié)果表明:親本中有21對SSR引物可穩(wěn)定表現(xiàn)出多態(tài)性，多態(tài)性比例為6％。利用篩選出

4、的21對SSR引物在F2(‘210’ב002’)的158個單株中進行SSR擴增，獲得3個與不結(jié)球白菜自交不親和基因連鎖的分子標記，分別為Na12E02，KBRH138G23以及sR6688。通過Mapmaker3.0軟件計算連鎖距離，3個標記與自交不親和基因的遺傳距離分別為3.08cM,5.35cM和12.91cM。
　　3.在獲得與自交不親和基因連鎖的分子標記Na12E02的基礎上，采用MISA和Primer3.0軟件在Na1

5、2E02附近3cM范圍開發(fā)設計SSR引物，最終得到22對SSR分子標記。研究發(fā)現(xiàn)，開發(fā)設計的22對SSR引物均能在親本中擴增出較為清晰的條帶，有效引物比例為100％，其中5對引物在親本中具有多態(tài)性，多態(tài)性引物比例為22.7％。將篩選得到的5對SSR引物在F2(‘210’ב002’)分離群體的158個單株中進行進一步驗證，得到一個與自交不親和基因緊密連鎖的分子標記BrSS15。通過Mapmaker3.0軟件計算遺傳距離為0.49cM。這