用玉米與小麥—簇毛麥易位系雜交誘導(dǎo)小麥雙單倍體.pdf

1、簇毛麥(HaynaldiavillosaL.2n=14，VV)是一年生異花授粉草本植物，原產(chǎn)于地中海沿岸和高加索地區(qū)，是小麥的野生近緣物種，抗多種小麥病害，它幾乎對所有白粉病生理小種表現(xiàn)免疫，還具有抗寒、耐旱、籽粒蛋白質(zhì)含量高等多種優(yōu)良性狀。培育簇毛麥小片段易位系是利用簇毛麥有益基因的理想途徑。用玉米花粉誘導(dǎo)小麥單倍體再用秋水仙堿處理使染色體數(shù)加倍是一種高效率的小麥單倍體育種途徑，這種方法能在較短的年限內(nèi)快速獲得純合體。
　　本研

2、究以多種小麥-簇毛麥易位系為母本材料，利用白甜糯玉米和蘇玉糯6號玉米花粉用滾粉法或沾粉法與之雜交。授粉后24小時剪下雜交穗，噴施100ppm濃度的2，4-D，在人工氣候箱中進(jìn)行割穗離體培養(yǎng)。14-15天后，剪下雜交穗剝?nèi)∨虼蟮姆f果，在超凈工作臺解剖鏡下剝?nèi)∮着?，接種于1/2MS培養(yǎng)基中進(jìn)行胚培養(yǎng)至成苗。待小麥單倍體苗長到2-3片真葉后將得到的幼苗遵照逐漸過渡的原則從培養(yǎng)基中移栽到土壤中。單倍體苗有2-3個以上分蘗時，采用浸泡分蘗節(jié)法或分

3、蘗節(jié)注射法用秋水仙堿進(jìn)行染色體加倍處理。用秋水仙堿處理后的植株移栽至土壤，待成熟時收獲套袋自交結(jié)實植株。收獲的種子，用分子細(xì)胞學(xué)方法進(jìn)行鑒定，篩選含有簇毛麥外源片段的小麥雙單倍體植株。
　　利用上述方法兩年中得到的單倍體胚分別為1031個和66個，得到的結(jié)實植株分別為42株和12株。
　　對第一年實驗獲得的42個結(jié)實植株后代進(jìn)行體細(xì)胞染色體計數(shù)，發(fā)現(xiàn)42株結(jié)實植株均為雙單倍體植株。這些植株經(jīng)根尖細(xì)胞有絲分裂中期染色體GISH

4、、順次C-分帶-FISH、分子標(biāo)記、花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂中期Ⅰ染色體配對和自交結(jié)實率鑒定，共檢測到7株涉及簇毛麥外源染色體片段的DH植株，其中包括6個整臂易位材料和1個大片段易位材料，并初步判斷6個整臂易位材料為T4VS·4DL純合易位系，1個大片段易位材料為T2BS-1VS·1VL純合易位系。本研究首次利用玉米花粉與攜有外源染色體的小麥-簇毛麥易位雜合體進(jìn)行有性雜交誘導(dǎo)小麥單倍體，進(jìn)而用秋水仙堿對小麥單倍體植株處理，成功的獲得遺傳穩(wěn)定的