類豬圓環(huán)病毒2型因子P1感染Balb-c小鼠模型的建立.pdf

1、豬圓環(huán)病毒(PCV)是一種無(wú)囊膜、共價(jià)閉合、單股環(huán)狀DNA病毒，屬于圓環(huán)病毒科，圓環(huán)病毒屬。PCV包括PCV-1和PCV-2兩個(gè)型，PCV-1對(duì)豬為非致病性的，PCV-2與豬的多種疾病綜合征有關(guān)。PCV-2是斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)的主要病原，但僅有PCV-2并不足以引發(fā)典型癥狀。
　　 本實(shí)驗(yàn)室在診斷PMWS的過(guò)程中，檢測(cè)到一種新的病毒因子P1。P1是環(huán)狀DNA，有648個(gè)核苷酸，部分與PCV-2ORF2高度同源。

2、雖然現(xiàn)在對(duì)P1因子的生物學(xué)特性以及其與PCV-2的鑒別診斷上有了初步研究，但是有關(guān)其在動(dòng)物體內(nèi)的增殖規(guī)律、致病機(jī)理尚不清楚，需要建立P1感染模型來(lái)進(jìn)一步研究。
　　 首先，建立了實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法。根據(jù)P1因子的基因序列設(shè)計(jì)合成了一對(duì)引物和探針，通過(guò)對(duì)反應(yīng)條件和反應(yīng)體系的優(yōu)化，成功建立了TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法。該方法具有特異、靈敏、快速等優(yōu)點(diǎn)，在101-108拷貝/μL之間具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)達(dá)到

3、0.99以上，擴(kuò)增效率在90％-105％之間。
　　 其次，對(duì)P1感染Balb/c小鼠的模型進(jìn)行了研究。健康的Balb/c小鼠經(jīng)腹腔注射P1細(xì)胞毒，通過(guò)比較體重增長(zhǎng)率，檢測(cè)P1對(duì)小鼠的直接影響;利用建立的實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)合ELISA方法、免疫組化技術(shù)，研究P1因子感染后Balb/c小鼠組織中病毒核酸含量的動(dòng)態(tài)變化、P1因子抗體水平變化以及抗原在組織中的定位。體重增長(zhǎng)率的結(jié)果表明，攻毒后第14d、21d，3次攻毒組的小鼠體重增