基于SSR分子標記技術鑒定甜菜種質(zhì)資源.pdf

1、本文通過對123對 SSR引物篩選、SSR體系優(yōu)化和57份甜菜材料的鑒定，以期建立穩(wěn)定、精確、經(jīng)濟和快捷的甜菜種質(zhì)資源 SSR分子標記鑒定體系，并對57份供試甜菜材料進行了評價，為甜菜種質(zhì)資源鑒定和有效利用提供了科學方法和理論依據(jù)。主要結果如下：
　　1優(yōu)化了甜菜 SSR分子標記技術體系。比較了模板 DNA、正反引物、Mg2+、dNTPs、Taq酶濃度，退火溫度和銀染技術對 PCR擴增反應的影響，建立了適用于甜菜種質(zhì)資源鑒定的PC

2、R反應體系。PCR擴增反應體系的體積是20μL：Mg2+25.0 mM選擇2.0μL,10×buffer體積2.5μL，dNTPs（2.5 mM）2.0μL，Taq酶（2.5 U/μL）0.10μL，SSR正反引物（100μM）各1.0μL，模板 DNA（30 ng/ul）體積2.0μL，無菌水9.40μL。 PCR反應程序是：PCR擴增前94℃預變性5分鐘，35個循環(huán)，每個循環(huán)在94℃變性0.5分鐘，溫度50-52℃（根據(jù)引物定）退火

3、1分鐘，72℃延伸0.5分鐘。銀染技術：10％乙醇、0.5%乙酸和0.2%硝酸銀中染色5分鐘。PCR擴增產(chǎn)物在6%聚丙烯酰胺凝膠上分離。從123對甜菜 SSR引物中篩選出10對應用于本試驗供試材料的鑒定引物，并從10對引物中確定了2對最適引物。
　　22對引物在57份供試材料中共檢測到30個等位基因變異，每對引物能夠檢測出18和12個等位基因變異，平均檢測數(shù)為15個；PIC值0.86和0.89，平均為0.875。57份甜菜供試材料