河北省番茄黃化卷葉病毒的分子鑒定與同源性分析.pdf

1、本研究在對(duì)河北省發(fā)生的番茄黃化卷葉病毒病的病原進(jìn)行分子鑒定,并對(duì)其病原分子的變異和進(jìn)化情況進(jìn)行分析。根據(jù)已知的番茄黃化卷葉病毒(Tomatoyellowleafcurlvirus,TYLCV)基因組序列設(shè)計(jì)了一對(duì)特異引物PA1F/R,對(duì)河北省四個(gè)發(fā)病樣品DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,得到大小為645bp的目的片段,并對(duì)其進(jìn)行回收、克隆并測序,結(jié)果顯示擴(kuò)增出的目的片段與番茄黃化卷葉病毒有99%以上的同源性,這表明在河北省采集的4個(gè)病株樣本均為感染

2、了番茄黃化卷葉病。
　　 隨后根據(jù)645bp特異性片段的測序結(jié)果重新設(shè)計(jì)一對(duì)反向引物PA2F/R,擴(kuò)增病毒樣品DNA-A的近全長序列,并進(jìn)行同源性比較及分子系統(tǒng)進(jìn)化分析。結(jié)果顯示,河北4個(gè)病毒樣品的全長為2781～2782個(gè)核苷酸,其基因組構(gòu)成滿足菜豆金色花葉病毒屬病毒基因組的典型特征,共編碼6個(gè)ORFs,分別是位于病毒鏈上的AV1基因(308-1084nt,編碼CP)和AV2基因(148-498nt,編碼與移動(dòng)蛋白相關(guān)的蛋白)

3、以及位于互補(bǔ)鏈上的AC1基因(1542-2615nt)、AC2基因(1226-1633nt)、AC3基因(1081-1485nt)和AC4基因(2171-2464nt)。在AV2和AC1之間含有一個(gè)非編碼的基因間區(qū)(intetgenicregion,IR),IR區(qū)含有莖環(huán)結(jié)構(gòu)和保守的九核苷酸序列TAATATT/AC。基因組比較發(fā)現(xiàn),4個(gè)樣品DNA-A與山東、上海、浙江、安徽以及日本、澳大利亞報(bào)道的TYLCV的同源性最高,均達(dá)99.0%以