侵染茄科蔬菜的三種病毒以及番茄黃化曲葉病毒伴隨衛(wèi)星的檢測(cè)與分子鑒定.pdf

1、植物病毒病是蔬菜種植業(yè)的重要限制因素，目前已經(jīng)成為制約我國(guó)蔬菜產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要因素。
　　番茄黃化曲葉病毒（Tomatoyellow leaf curl virus，TYLCV），屬于雙生病毒科菜豆金黃花葉病毒屬，引起番茄黃化曲葉病，是通過(guò)媒介昆蟲(chóng)-煙粉虱傳播的蔬菜生產(chǎn)上的一種毀滅性病害。蠶豆萎蔫病毒(Broad bean wilt virus, BB WV)，為世界性流行的病毒，它的寄主范圍極廣，造成嚴(yán)重的危害，在各產(chǎn)區(qū)均有

2、分布。番茄褪綠病毒(Tomatochlorosis virus, ToCV)病是從國(guó)外傳入我國(guó)的一種煙粉虱傳播的新型病毒病，可以侵染多種植物。
　　本研究主要以TYLCV及其衛(wèi)星、BBWV和ToCV為主要對(duì)象，以PCR技術(shù)為基礎(chǔ)，對(duì)山東省、河南省、河北省和遼寧省蔬菜主產(chǎn)區(qū)展開(kāi)系統(tǒng)調(diào)查，目的是摸清蠶豆萎蔫病毒與番茄褪綠病毒的發(fā)生分布情況和寄主范圍，以及伴隨番茄黃化曲葉病毒的衛(wèi)星分子。
　　研究結(jié)果表明，在對(duì)山東省、河南省、河北

3、省和遼寧省TYLCV樣品的檢測(cè)過(guò)程中，同時(shí)利用雙生病毒衛(wèi)星DNA的通用引物beta01/beta02，對(duì)TYLCV陽(yáng)性樣品進(jìn)行了DNAβ的檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，山東昌邑縣、河南焦作市感病樣品可以擴(kuò)增出約1.3Kb的特異性條帶，經(jīng)序列比對(duì)，發(fā)現(xiàn)與越南黃化曲葉病毒衛(wèi)星分子(Tomatoyellow leaf curlVietnam betasatellite(TYLCVNB)一致性為88％，均為越南黃化曲葉病毒衛(wèi)星DNAβ分子，表明山東省、河南省

4、TYLCV分離物中含有這種新型的DNAβ分子，這是國(guó)內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)TYLCV病毒DNA-A與越南黃化曲葉病毒衛(wèi)星DNAβ以病害復(fù)合體形式存在。通過(guò)檢測(cè)和序列分析，基本確定了TYLCV病毒伴隨衛(wèi)星分子的主流種類和其發(fā)生蔓延、分子變異及流行趨勢(shì)等;
　　基本摸清了BBWV病毒在山東省辣椒主產(chǎn)區(qū)的發(fā)生分布情況。從山東省共采集到55份辣椒樣品，采用蠶豆病毒屬的引物BBWV-R1F/R1R，R2F-1F/R2F-1R，及包含有LCP與SCP的引

5、物，對(duì)供試?yán)苯凡≈赀M(jìn)行BBWV的RT-PCR擴(kuò)增，分別擴(kuò)增到大小約為570bp、1.3Kb、600bp、1.4Kb的特異性條帶，篩選出3株陽(yáng)性樣品，與預(yù)期結(jié)果一致，獲得2條BBWV2-RNA2包含SCP及部分LCP序列，證實(shí)了采集的山東昌邑、青州辣椒樣品被蠶豆萎蔫病毒病毒侵染。其中，BBWV2-RNA1序列與韓國(guó)分離物RP4具有較高的序列同源性，為94.61％，BBWV2-RNA2與韓國(guó)分離物AF104335一致性可達(dá)96.03％，首次

6、報(bào)道采用了RT-PCR法從山東辣椒上檢測(cè)到BBWV2，并將該分離物的核酸序列與國(guó)內(nèi)發(fā)現(xiàn)的其他BBWV2分離物進(jìn)行分析;
　　通過(guò)對(duì)河北多個(gè)縣市的番茄種植區(qū)調(diào)查，基本摸清了ToCV病毒在河北省的發(fā)生分布情況。從9個(gè)地區(qū)共采集到290份番茄樣品、48份雜草樣品，以ToCV外殼蛋白和熱激蛋白共3對(duì)特異引物對(duì)ToCV疑似樣品進(jìn)行檢測(cè)，分別擴(kuò)增到約1032bp、943bp和911bp的特異條帶，其中132份番茄樣品帶有ToCV，而在雜草上并