miRNA與水稻種子活力的相關性研究.pdf

1、miRNA(microRNA)是一類真核生物細胞中廣泛存在的內源性非編碼的單鏈小分子RNA,大小為19～25 nt。越來越多的研究發(fā)現(xiàn),miRNA是真核生物體內基因表達的重要調節(jié)因子。
　　 本文以常規(guī)水稻ZR02為材料,試圖探討miRNA表達與種子活力的相互關系。首先采用人工老化處理,得到不同活力水平的種子,然后通過miRNA芯片比較分析了四個不同活力水平的種子胚中miRNA的表達差異,并通過熒光定量PCR技術對差異表達的mi

2、RNA進行了驗證分析,進一步通過生物信息學的方法,初步分析了這些差異表達miRNA的靶基因及其功能。主要結果如下:
　　 1.隨著人工老化處理時間的延長,種子活力逐漸下降,種子活力的重要指標一萌發(fā)率在老化處理12 d時降低到75％左右,此后下降速率明顯加快,老化至第22 d時種子喪失萌發(fā)能力(萌發(fā)率為O)。
　　 2.通過miRNA芯片比較分析了人工老化至不同活力水平的種胚中miRNA的差異表達。結果表明,隨著種子活力降

3、低,miRNA的表達模式可分為以下四種情況:(1)表達逐步下調,如miR160和miR444a.2/miR444d.2/miR444e；(2)表達逐步上調,如miR817、miR399j等；(3)交替上、下調表達,相比于未老化種子,表達總體水平上調,如miR395t、miR164c等；(4)交替上、下調表達,相比于未老化種子,表達總體水平下調,如miR164e、miR167(a-j)。
　　 3.通過實時定量PCR進一步驗證芯片

4、分析獲得的20個表達差異明顯的miRNA,結果表明,miR817、miR399j、miR399d、miR395t、miR164c、miR168a等6個的表達量變化與芯片結果較為一致。
　　 4.同源miRNA成熟序列的保守性與其在不同活力種胚中的表達量變化的相關性分析表明,成熟序列保守性高的同源miRNAs在不同活力種胚中的表達量的變化規(guī)律較為相似,保守性較低的同源miRNAs表達差異較大。
　　 5.通過生物信息學的方