平邑甜茶MhWRKY15基因的克隆及表達(dá)分析.pdf

1、轉(zhuǎn)錄因子是結(jié)合在目的基因特定DNA序列上的蛋白質(zhì)，它通過(guò)增強(qiáng)或抑制基因的轉(zhuǎn)錄效率來(lái)調(diào)控基因的表達(dá)水平，真核生物的基因表達(dá)調(diào)控主要是在轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行。WRKY轉(zhuǎn)錄因子作為一種重要的誘導(dǎo)型調(diào)節(jié)因子，參與植物的多種防衛(wèi)反應(yīng)、生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)節(jié)以及物質(zhì)代謝調(diào)節(jié)等各種重要生理活動(dòng)。
　　 平邑甜茶（Malus hupehensis(Pamp)Rehd.Var pinyiensis Jiang）是我國(guó)特有的植物資源，常用作蘋(píng)果和觀賞海棠的砧木。本研

2、究以平邑甜茶為試材，克隆了MhWRKY15基因的全長(zhǎng)cDNA序列，并運(yùn)用生物信息學(xué)手段分析了其基因序列與編碼蛋白的性質(zhì)和功能；同時(shí)，研究了其在生長(zhǎng)過(guò)程及逆境脅迫下的表達(dá)情況，并成功構(gòu)建RNAi載體并轉(zhuǎn)化擬南芥，獲得轉(zhuǎn)基因擬南芥植株。主要結(jié)果如下：
　　 1).獲得了平邑甜茶MhWRKY15基因，該基因cDNA全長(zhǎng)1091bp，含有810bp的完整開(kāi)放閱讀框，編碼269個(gè)氨基酸，屬于WRKY類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子的第II組，為WRKY15家族

3、成員。GenBank登錄號(hào)為GU576874。
　　 2).生物信息學(xué)分析表明，MhWRKY15編碼蛋白為可溶性蛋白，其分子式為C1263H1941N365O425S12，相對(duì)分子量為29423.2Da，理論等電點(diǎn)為5.30；含有一個(gè)WRKY保守結(jié)構(gòu)域，無(wú)跨膜域，無(wú)信號(hào)肽，存在磷酸化、N糖基化和O糖基化位點(diǎn)；其二級(jí)結(jié)構(gòu)主要以無(wú)規(guī)則卷曲為主。
　　 3).構(gòu)建了pCAMBIA1390-MhWRKY15-GFP表達(dá)載體，亞細(xì)