事邑甜茶雜交群體表達(dá)譜分析及MhAN1-like基因的功能鑒定.pdf

1、蘋果在我國(guó)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整和農(nóng)民增收中占有十分重要地位，砧木的選擇在提高蘋果產(chǎn)量和質(zhì)量方面起著重要的作用。無(wú)融合生殖特性是保證苗木生長(zhǎng)整齊的重要農(nóng)藝性狀，選育抗性強(qiáng)、根系發(fā)達(dá)的無(wú)融合生殖實(shí)生砧木是重要的育種目標(biāo)。目前，人們對(duì)無(wú)融合生殖的分子機(jī)理還不清楚，限制了無(wú)融合生殖特性在砧木改良中的應(yīng)用。本文運(yùn)用表達(dá)譜分析技術(shù)，對(duì)平邑甜茶無(wú)融合生殖相關(guān)基因進(jìn)行高通量分析，并選擇MhAN1-like進(jìn)行分子克隆和功能鑒定。主要結(jié)果如下:
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2、.平邑甜茶雜交群體表達(dá)譜分析:結(jié)果表明，與低單性生殖率群體相比在高單性生殖率群體中，表達(dá)上調(diào)和下調(diào)的基因分別為609和723個(gè)。而在與低無(wú)融合非減分裂群體相比在高無(wú)融合非減分裂群體中，133個(gè)基因表達(dá)上調(diào)，357個(gè)基因表達(dá)下調(diào)。差異基因富含亮氨酸、蛋白激酶、鋅指結(jié)構(gòu)等多種結(jié)構(gòu)域。涉及抗性機(jī)制、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、染色質(zhì)水平調(diào)節(jié)等多種功能。差異基因主要在細(xì)胞內(nèi)富集;參與次級(jí)代謝途徑、氨基酸代謝途徑、能量代謝途徑等各種生理生化過程。
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3、hAN1-like生物信息學(xué)分析和原核表達(dá):基因MhAN1-like的ORF為582bp，推測(cè)編碼193個(gè)氨基酸，蛋白含有兩個(gè)AN1結(jié)構(gòu)域;37℃條件下成功對(duì)MhAN1-like蛋白進(jìn)行了原核表達(dá)。
　　3.亞細(xì)胞定位:采用GFP融合蛋白技術(shù)進(jìn)行了亞細(xì)胞定位分析，結(jié)果表明MhAN1-like蛋白定位于細(xì)胞核中。
　　4.功能鑒定:獲得了該基因的轉(zhuǎn)基因番茄株系，干旱處理表型分析表明，在番茄中異位表達(dá)MhAN1-like基因的明