碭山梨炭疽病菌鑒定及有效藥劑篩選.pdf

1、近年來，在黃河故道地區(qū)“碭山酥梨”、“黃冠梨”、“馬蹄黃”等品種上，發(fā)生了一種嚴重的病害，具體表現(xiàn)在梨成熟前先是果實、葉片表面出現(xiàn)一至多個黑點，3～5d后病果出現(xiàn)圓形或不規(guī)則形的輪紋狀或凹陷狀病斑，蔓延很快，難以控制，當?shù)厮追Q“黑點病”。這種病害不僅造成采前果實腐爛，還引起樹體大量落葉。2008年，安徽省碭山縣梨園炭疽病暴發(fā)，部分發(fā)病嚴重的梨園，采前病果率為100％，爛果率高達70％以上，當?shù)乩娼?jīng)濟損失慘重。
　　 為了明確近年

2、來嚴重為害碭山梨的致病病原菌種類，研究常用殺菌劑對致病菌菌絲生長、分生孢子萌發(fā)的抑制作用，作者對碭山地區(qū)不同梨園病害發(fā)生情況進行實地調(diào)查，統(tǒng)計不同樹齡、不同種植密度梨園病害的發(fā)生情況，并采集了6組標樣；對這6種不同病斑癥狀類型的果實、葉片樣本分別進行發(fā)病組織培養(yǎng)、單孢分離純化，根據(jù)病原菌的形態(tài)特征和致病性，進行初步鑒定；采用CTAB法提取病原菌基因組DNA，以之為模板，利用真菌rDNA-ITS克隆通用引物ITS1和ITS4進行PCR擴增

3、，擴增產(chǎn)物經(jīng)凝膠回收試劑盒回收、測序，利用NCBI在線Blast工具進行致病菌rDNA-ITS同源性比較，應(yīng)用BioEdit程序進行序列分析，并用MEGA3.1軟件按照UPGMA法構(gòu)建系統(tǒng)聚類樹。選用24種常用殺菌劑分別對病原菌菌絲和分生孢子進行處理，觀測其化學(xué)抑制效果。
　　 試驗主要研究結(jié)果如下：
　　 1、田間調(diào)查結(jié)果顯示，不同種植密度的梨樹發(fā)病情況不一，栽培密度為2m×4 m梨樹發(fā)病最重，病果率達到40.42％;

4、5 m×6 m發(fā)病較重，病果率為31.24％;8 m×8 m發(fā)病較輕，病果率為11.07％。
　　 2、病原形態(tài)與致病性研究：本試驗從不同癥狀類型病斑上分離出了6個純化菌株，通過病原菌形態(tài)學(xué)鑒定，這6個病原菌菌株形態(tài)特征相同，且與已報道的炭疽病菌（Colletotrichum spp.）形態(tài)特征相似；用上述純培養(yǎng)菌株接種于健康果實和葉片上，又引起與田間原標本相同的病害癥狀。
　　 3、病原分子鑒定：通過病原菌rDNA-I

5、TS克隆測序、BLASTn比對分析，6個菌株為同一致病菌，且該致病菌與臺灣棗（Taiwan jujube）炭疽菌株（Colletotrichum sp. EXMQ-1：登錄號FJ233185）、日本超市水果(Japanese fruit)炭疽菌株（Glomerella cingulata;登錄號AB219012）和鳳梨草莓（Fragaria ananassa）炭疽菌株（C gloeosporioides；登錄號EU200455）的rDN

6、A-ITS序列一致。
　　 4、抑菌試驗結(jié)果顯示，戊唑醇430 g/L懸浮劑等8種殺菌劑對病原菌菌絲生長抑制率達100％;70％代森錳鋅可濕性粉劑等8種藥劑處理，病原菌分生孢子萌發(fā)率為0。
　　 試驗結(jié)果表明危害碭山梨的炭疽病病原菌為半知菌亞門刺盤孢屬的膠胞炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides），其有性階段為圍小叢殼（Glomerella cingulata）。不同的化學(xué)藥劑處理，對梨炭疽