2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、茶樹(Camelliasinensis(L.)O.Kuntze),原產(chǎn)于熱帶及亞熱帶,是一種喜暖喜濕的葉用植物。近年來全球氣候變化異常,春茶頻繁的遭遇低溫災(zāi)害,進而造成產(chǎn)量減少、品質(zhì)下降和上市時間推后等問題,嚴重影響了春季名優(yōu)茶的生產(chǎn)和經(jīng)濟效益。與大多其它被子植物花粉(如百合)不同,茶樹花粉管在低溫下仍能萌發(fā)、生長。本實驗利用cDNA-AFLP的方法進行茶樹花粉管低溫脅迫下基因差異表達分析,獲得低溫脅迫下表達的差異片段,并對這些片段進行

2、分析,克隆獲得與低溫脅迫下茶樹花粉管生長相關(guān)的基因,并對這些基因的序列、生物信息學(xué)及相關(guān)功能進行初步分析。具體研究結(jié)果如下:
  (1)利用cDNA-AFLP技術(shù)構(gòu)建茶樹花粉管低溫脅迫下基因差異表達圖譜。比較了常溫培養(yǎng)和低溫脅迫下茶樹花粉管基因表達差異,結(jié)果表明兩者存在明顯差異。選擇性回收了13條差異條帶,克隆測序,并與GenBank數(shù)據(jù)庫中的序列進行Blastx比對,其中有10個序列與已知功能的蛋白序列有一定程度的相似,有3個功

3、能未知。其中TDF1與蕪菁(Brassicarapa)的丙酮酸脫氫酶E1α亞基高度相似(91%);TDF2與葡萄(Vitisvinifera)的類鈣調(diào)蛋白CML21具有較高的同源性(87%);TDF4與茶樹的14-3-3蛋白相似;TDF5與蓖麻(Ricinuscommunis)的磷脂酶D有74%相似性;TDF7與葡萄(Vitisvinifera)的硫氧還原蛋白h(1)74%相似;TDF9與矮牽牛(Petuniaxhybrida)的β-半

4、乳糖苷酶相似(71%)。
  (2)根據(jù)前期獲得的差異片段TDF1,通過Blastx比對顯示與其他物種的丙酮酸脫氫酶E1α亞基高度相似,通過3'RACE/5'RACE分別獲得其3'/5'端序列,從而獲得該基因的cDNA序列全長,命名為茶樹CsE1α基因,GenBank登錄號為JQ999982。利用熒光定量PCR技術(shù)分析顯示,該基因在花粉中高度表達;在花粉培養(yǎng)過程中,CsE1α在花粉萌發(fā)30分鐘時表達量最高,即花粉萌發(fā)時期(水合狀態(tài)

5、),而花粉管生長時期(培養(yǎng)1h、2h、3h)其表達基本保持不變。
  (3)根據(jù)前期獲得的差異片段TDF2,通過Blastx比對顯示與其他物種的類鈣調(diào)蛋白CML21具有較高的同源性,通過3'RACE/5'RACE分別獲得其3'/5'端序列,從而獲得該基因的cDNA全長,命名為茶樹CsCML21基因,GenBank登錄號為JQ999983。熒光定量PCR技術(shù)分析顯示,該基因在花粉中大量表達;在花粉培養(yǎng)過程中,CsCML21的表達量在

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