喜樹毛狀根培養(yǎng)體系的建立及喜樹hmgs基因的克隆分析.pdf

1、中國特有樹種喜樹(Camptotheca acuminata)是喜樹屬(Camptotheca Decne)植物。喜樹堿(camptothecin)是Wall等1966年在喜樹木質(zhì)部中分離到的一種具有顯著抗腫瘤活性的生物堿。喜樹堿及其衍生物、紫杉醇以及維生素甲類化合物抗腫瘤作用的發(fā)現(xiàn)被譽(yù)為“20世紀(jì)90年代抗癌藥物的三大發(fā)現(xiàn)”。喜樹堿是通過抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ發(fā)揮細(xì)胞毒性的天然植物活性成分。本文以喜樹為研究對象，從基因克隆，表達(dá)分析，誘導(dǎo)調(diào)

2、控及喜樹堿含量比較等方面開展了一系列的工作，并取得了以下結(jié)果： 1.首次從喜樹中克隆了3-羥基—3-甲基戊二酰輔酶A合成酶基因CaHMGS，該基因全長為1801bp，含有一個1416bp的開放閱讀框，編碼一個具有472個氨基酸的蛋白；序列比較和進(jìn)化分析，發(fā)現(xiàn)CaHMGS與其他植物HMGS具有較高的同源性；組織特異性表達(dá)分析結(jié)果表明CaHMGS并不是一個組成型表達(dá)基因，在胚軸和子葉中表達(dá)量相似，而在根中檢測不到表達(dá)；一個月喜樹幼苗

3、誘導(dǎo)處理結(jié)果表明CaHMGS是一個至少在轉(zhuǎn)錄水平上受到調(diào)控的基因，MJ和SA均能在胚軸中非常有效地誘導(dǎo)CaHMGS表達(dá)上調(diào)。 2.首次系統(tǒng)地研究了不同外植體類型(包括真葉，莖段，子葉及胚軸)，胚軸年齡和不同發(fā)根農(nóng)桿菌菌株(包括A4，15834，R1601及C58C1)等因素對喜樹毛狀根誘導(dǎo)頻率的影響，并用PCR對誘導(dǎo)出的毛狀根進(jìn)行了分子鑒定。實驗結(jié)果表明：5-10天是胚軸最佳誘導(dǎo)年齡段，最佳菌株為15843。 3.成功地