煙臺(tái)地區(qū)奶牛隱孢子蟲(chóng)病的流行病學(xué)調(diào)查及分子種系發(fā)育關(guān)系的研究.pdf

1、隱孢子蟲(chóng)病(cryptosporidiosis)是由隱孢子蟲(chóng)(Cryptosporidium)引起的一種世界性的人獸共患原蟲(chóng)病。該病對(duì)人類健康和動(dòng)物生產(chǎn)帶來(lái)嚴(yán)重危害，主要造成嬰幼兒及免疫功能低下者致死性腸炎，是人類愛(ài)滋病患者死亡的直接原因之一;動(dòng)物多發(fā)于幼齡，主要表現(xiàn)為頑固性下痢，即使康復(fù)亦常復(fù)發(fā)，使生長(zhǎng)受阻，造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外關(guān)于隱孢子蟲(chóng)研究的報(bào)道逐漸增多，煙臺(tái)地區(qū)關(guān)于此病的研究較少。
　　 本研究根據(jù)GenB

2、ank中已發(fā)表的隱孢子蟲(chóng)18srRNA基因設(shè)計(jì)一對(duì)引物，以從卵囊中提取的DNA為模板，對(duì)18srRNA基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，按常規(guī)方法與載體連接，經(jīng)藍(lán)白斑篩選和PCR鑒定獲得陽(yáng)性重組質(zhì)粒，分別繪制質(zhì)粒DNA和奶牛隱孢子蟲(chóng)卵囊的標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立檢測(cè)奶牛隱孢子蟲(chóng)18sRNA的SYBRGreenⅠreal-timePCR，并驗(yàn)證real-timePCR方法的特異性、敏感性和重復(fù)性;在real-timePCR檢測(cè)隱孢子蟲(chóng)方法建立的基礎(chǔ)上，對(duì)采自煙臺(tái)

3、地區(qū)6個(gè)奶牛場(chǎng)共565頭奶牛的新鮮糞便進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，分析奶牛隱孢子蟲(chóng)感染與腹瀉、季節(jié)、年齡等方面的相關(guān)性;從陽(yáng)性樣本中分離蟲(chóng)株，對(duì)分離株18srRNA基因進(jìn)行序列分析，繪制進(jìn)化樹(shù)，分析分子種系發(fā)育關(guān)系，進(jìn)而鑒定分離株的基因型。
　　 試驗(yàn)結(jié)果表明:本研究建立的real-timePCR方法敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性良好，最低檢測(cè)閾為10個(gè)拷貝的質(zhì)粒DNA和1g糞便中的10個(gè)卵囊，重復(fù)性試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)差為0.494;6個(gè)奶牛場(chǎng)的隱孢

4、子蟲(chóng)感染率分別為12.75％、9.18％、10.67％、15.11％、11.11％和5.26％，總陽(yáng)性率為10.44％，隱孢子蟲(chóng)感染主要來(lái)自于有腹瀉癥狀的犢牛和青年牛，并以冬季和春季為多發(fā)季節(jié);對(duì)分離到的YT1-6和YT7-16兩類隱孢子蟲(chóng)的18sRNA基因測(cè)序結(jié)果表明該兩類蟲(chóng)株卵囊序列與GenBank上的C.andersoni(AF093496)和C.parvum(AF108863)“mouser”型18srRNA基因核苷酸序列同源性