寧夏地區(qū)牛結(jié)核病的分子流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、目的：分離培養(yǎng)并鑒定牛源分枝桿菌；對(duì)分離獲得的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群菌株進(jìn)行基因多態(tài)性研究，從分子流行病學(xué)角度分析寧夏地區(qū)牛結(jié)核病流行特點(diǎn)；對(duì)非結(jié)核分枝桿菌親緣關(guān)系進(jìn)行研究，初步了解非結(jié)核分枝桿菌在本地奶牛中的流行情況。
　　 方法：采集牛鼻拭子和牛咽拭子，對(duì)其進(jìn)行處理，以羅氏培養(yǎng)法分離培養(yǎng)臨床牛源分枝桿菌，并應(yīng)用PCR方法做進(jìn)一步鑒定；采用基于PCR的VNTR分型方法，對(duì)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群臨床分離株進(jìn)行多態(tài)性研究；采用ERIC方法

2、對(duì)非結(jié)核分枝桿菌親緣關(guān)系進(jìn)行研究。
　　 結(jié)果：
　　 1.對(duì)2040份臨床鼻拭子和咽拭子常規(guī)處理后，利用羅氏培養(yǎng)法對(duì)牛結(jié)核病病原菌進(jìn)行分離培養(yǎng)，應(yīng)用PCR方法對(duì)形態(tài)學(xué)及涂片染色呈陽(yáng)性的細(xì)菌進(jìn)行鑒定。共獲得結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群菌株(MTC)27株，非結(jié)核分枝桿菌34株。27株MTC中，25株為寧夏分離株(14株為牛分枝桿菌，11株為結(jié)核分枝桿菌)，2株是新疆分離株(2株均為牛分枝桿菌)。
　　 2.采用VNTR基因

3、分型方法，對(duì)7株?yáng)|北地區(qū)臨床株、本實(shí)驗(yàn)室分離培養(yǎng)的25株寧夏地區(qū)臨床株和2株新疆地區(qū)臨床株進(jìn)行基因多態(tài)性研究。在相似系數(shù)90％的水平上，得到26個(gè)基因型，其中包含8個(gè)簇(每2株一簇)和18個(gè)獨(dú)特基因型。相似系數(shù)80％的水平上形成10個(gè)簇，3個(gè)獨(dú)特基因型，最大一簇包含7株菌。
　　 3.基因分型結(jié)果表明，存在養(yǎng)殖場(chǎng)的奶牛結(jié)核病流行情況，但沒有場(chǎng)爆發(fā)性流行情況。寧夏地區(qū)分離的11株結(jié)核分枝桿菌中，1株為北京基因型；6株?yáng)|北地區(qū)結(jié)核分

4、枝桿菌中，3株為北京基因型。以上數(shù)據(jù)表明，寧夏和東北地區(qū)均存在北京基因型菌株的感染情況。由于尚未有關(guān)于牛源北京基因型菌株的報(bào)道，因此認(rèn)為本實(shí)驗(yàn)中所研究的4株北京基因型株可能是由人傳染給牛。某些不同養(yǎng)殖場(chǎng)的菌株間相似系數(shù)達(dá)到了90％以上，可能這些場(chǎng)間存在奶牛相互引進(jìn)時(shí)造成結(jié)核病的傳染。在相似系數(shù)80％的水平上，最大1簇包含的7株牛分枝桿菌，來(lái)自6個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)，因此認(rèn)為該基因型牛分枝桿菌菌株可能是寧夏牛分枝桿菌流行株；國(guó)內(nèi)外數(shù)據(jù)比對(duì)結(jié)果顯示，寧