兩種三葉草雜交胚離體培養(yǎng)與F-,1-代擴(kuò)繁及其鑒定.pdf

1、缺乏優(yōu)良豆科牧草的蛋白質(zhì)供應(yīng)和固氮作用，是內(nèi)蒙古等地區(qū)畜牧業(yè)發(fā)展和草地土壤改良的關(guān)鍵限制因素之一。本研究選擇具有抗旱、耐寒、但固氮能力差的六倍體高加索三葉草與內(nèi)蒙古大興安嶺野生型固氮能力強(qiáng)、質(zhì)量好的四倍體白三葉進(jìn)行遠(yuǎn)緣雜交，以期獲得具有兩種牧草雜種優(yōu)勢(shì)的高產(chǎn)、抗旱、固氮能力強(qiáng)的雜種F1三葉草。由于兩種三葉草雜交后出現(xiàn)雜種胚敗育，因此采用人工雜交后對(duì)胚離體培養(yǎng)來挽救胚敗育。本試驗(yàn)以高加索三葉草與白三葉雜交后胚離體培養(yǎng)產(chǎn)生F1無菌苗的莖段為

2、外植體，篩選誘導(dǎo)愈傷組織合適培養(yǎng)基，將F1莖段產(chǎn)生的愈傷組織再繼代培養(yǎng)，然后轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基，研究不同濃度激素組合對(duì)體細(xì)胞胚胎發(fā)生的影響，并對(duì)F1進(jìn)行細(xì)胞學(xué)和同工酶標(biāo)記研究，鑒定雜交后代的真實(shí)性。主要結(jié)果如下： 1.MS+6—BA（2mg/L）+NAA（0.8mg/L）是誘導(dǎo)F1莖段愈傷組織的適宜培養(yǎng)基；MS+2，4—D（0.25mg/L）+6—BA（0.5mg/L）+NAA（0.25mg/L）+KT（0.5mg/L）+CH（2

3、50mg/L）為F1莖段愈傷組織的適宜分化培養(yǎng)基。 2.對(duì)分化后的胚性愈傷組織進(jìn)行組織學(xué)觀察，可見其表面形成許多瘤狀突起，這些瘤狀突起即為胚性細(xì)胞團(tuán)，它們可以繼續(xù)發(fā)育形成體細(xì)胞胚胎發(fā)生過程。 3.雜種F1無菌苗莖段在MS+2，4—D（0.25mg/L）+6—BA（2mg/L）和MS+2，4—D（0.1mg/L）+6—BA（2mg/L）培養(yǎng)基中出現(xiàn)器官發(fā)生現(xiàn)象。 4.對(duì)雜種F1體細(xì)胞染色體數(shù)目進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，確定其染色