半夏一步成苗技術(shù)體系及生理生化研究.pdf

1、本研究以野生半夏為材料，采用正交試驗(yàn)以誘導(dǎo)率、增殖率和成苗率為指標(biāo)對(duì)半夏組織培養(yǎng)物進(jìn)行了綜合評(píng)析，并研究半夏組織培養(yǎng)過(guò)程中施加外源激素對(duì)內(nèi)源激素、可溶性蛋白質(zhì)含量、過(guò)氧化物酶(POD)、苯丙氨酸裂解酶(PAL)、蛋白酶活性變化的影響。探討了半夏一步成苗過(guò)程中的細(xì)胞分化、器官發(fā)生與生理生化變化及其與培養(yǎng)條件的相互關(guān)系，得出以下主要結(jié)論。
　　 (1)通過(guò)正交試驗(yàn)得出塊莖是誘導(dǎo)半夏一步成苗的最優(yōu)外植體。
　　 (2)綜合誘導(dǎo)

2、率、增殖率、出苗率三個(gè)指標(biāo)，半夏一步成苗的最佳激素配比組合為MS+0.2mg/L2,4-D+1.0mg/LKT+0.1mg/LNAA。(3)半夏組培苗的移栽成活率都較高，最佳激素配比培養(yǎng)基中的塊莖組培苗和添加氮素（硝酸鉀5.5g、6.0g、6.5g）的培養(yǎng)基中的塊莖組培苗經(jīng)煉苗移栽以后，成活率為100％;最佳激素配比培養(yǎng)基中的葉片、葉柄組培苗的移栽成活率也均在90％以上，移栽成活的半夏苗還會(huì)發(fā)出新的半夏苗。
　　 (4)本試驗(yàn)中

3、通過(guò)正交試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基MS+0.2mg/L2,4-D+1.0mg/LKT+0.1mg/LNAA上的半夏組織培養(yǎng)物在14d或者21d時(shí)內(nèi)源IAA值達(dá)到高峰，其他處理中的內(nèi)源IAA高峰值均比該處理出現(xiàn)的晚很多，在28d或者35d。此峰值高低對(duì)不定芽分化有影響，說(shuō)明芽形成需要內(nèi)源生長(zhǎng)素的累積來(lái)啟動(dòng)。
　　 (5)通過(guò)對(duì)不同外源激素配比培養(yǎng)基中的半夏組織培養(yǎng)物內(nèi)源激素和形態(tài)發(fā)生之間關(guān)系的研究表明：各處理中愈傷組織不定芽的發(fā)生與內(nèi)源IAA

4、含量高低有關(guān)，內(nèi)源IAA極低沒(méi)有不定芽產(chǎn)生，不定芽的產(chǎn)生與形成需要經(jīng)歷一個(gè)內(nèi)源IAA的降低過(guò)程來(lái)完成。各處理愈傷組織不定芽的發(fā)生過(guò)程都伴隨著內(nèi)源CTK含量的下降。
　　 (6)對(duì)培養(yǎng)過(guò)程中半夏組織培養(yǎng)物的可溶性蛋白質(zhì)含量，蛋白酶、過(guò)氧化物酶(POD)、苯丙氨酸裂解酶(PAL)活性研究表明：蛋白質(zhì)水平、蛋白酶活性變化與愈傷組織生長(zhǎng)有關(guān)，但不能作為細(xì)胞分化的標(biāo)志。POD和PAL活性與器官的形成關(guān)系密切，各處理愈傷組織在形態(tài)發(fā)生過(guò)程中

5、POD活性規(guī)律有差異。PAL活性在各處理愈傷組織形態(tài)發(fā)生時(shí)變化規(guī)律一致，隨著不定芽形成活性下降，在根分化中起重要作用。
　　 (7)半夏各種外植體（葉片、葉柄、塊莖）的組培苗煉苗成活后的半夏塊莖中的總生物堿含量均高于野生半夏塊莖中的總生物堿含量；培養(yǎng)基中加入硝酸鉀既可提高又可降低半夏塊莖中的總生物堿含量，加入5.5克硝酸鉀的培養(yǎng)基培養(yǎng)出的半夏塊莖中的總生物堿含量高于未加硝酸鉀的培養(yǎng)基培養(yǎng)的半夏塊莖中的總生物堿含量。