微生物來源CpG疫苗佐劑篩選研究.pdf

1、CpG-DNA是一些具有免疫激活功能的以未甲基化的CpG基序為核心的DNA序列，它包括含CpG基序的人工合成的寡聚脫氧核苷酸和自然界中低等生物的基因組DNA。大量研究證實，CpG-DNA在體內(nèi)外均能刺激多種免疫活性細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子并能調(diào)節(jié)某些表面分子、趨化因子、粘附因子和共刺激分子等，誘導(dǎo)機(jī)體天然免疫系統(tǒng)活化，并產(chǎn)生抗原特異性的獲得性免疫應(yīng)答。 本項研究依據(jù)CpG-DNA的特性，合成和克隆了32條CpG-DNA序列，通過體外

2、篩選及動物免疫試驗選出4種免疫效果好、安全可靠的序列，為CpG-DNA免疫佐劑應(yīng)用打下了基礎(chǔ)。研究內(nèi)容如下： 從四種非致病性的食品釀造菌(枯草芽孢桿菌、德氏乳酸菌、黃色短桿菌、雙歧桿菌)基因組中找出27條CpG-DNA序列，由北京華大中生科技發(fā)展有限公司合成；在壞死梭桿菌保護(hù)性抗原基因篩選工作中，克隆了許多基因片段質(zhì)粒，從中找出4條富含CpG-DNA的序列；同時，在檢索節(jié)瘤擬桿菌纖毛蛋白基因中的CpG-DNA過程中，發(fā)現(xiàn)C型節(jié)瘤

3、擬桿菌纖毛蛋白基因中CpG-DNA含量較高，將克隆的壞死梭桿菌基因片段質(zhì)粒菌株與節(jié)瘤擬桿菌纖毛蛋白基因質(zhì)粒菌株分別提取質(zhì)粒，ECOR1酶切后回收目的CpG-DNA片段。 無菌采取羊、小鼠血液，肝素鈉抗凝。用淋巴細(xì)胞分離液分離羊、小鼠淋巴細(xì)胞。通過淋巴細(xì)胞增殖試驗篩選出4種對羊、小鼠淋巴細(xì)胞都有較強細(xì)胞增殖作用的序列。將淋巴細(xì)胞增殖試驗選出的CpG-DNA進(jìn)行動物安全性試驗，結(jié)果均無毒副作用。 分別用壞死梭桿菌抗原、重組節(jié)